miR—34a对人成骨肉瘤MG—63细胞生长增殖影响.docVIP

miR—34a对人成骨肉瘤MG—63细胞生长增殖影响 　　[摘要] 目的 探讨miR-34a对人成骨肉瘤MG-63细胞增殖的影响。 方法 运用miR-34a的mimics或inhibitors分别转染人成骨肉瘤MG-63细胞，分别为实验组，脂质体2000为对照组，采用甲基噻唑基四唑（MTT）法检测细胞增殖情况。 结果 对照组吸光度值在24 h、48 h和72 h分别为（0.33±0.02）、（0.55±0.03）、（0.75±0.06）；miR-34a mimics可抑制MG-63细胞增殖，其吸光度值分别降至（0.21±0.02）、（0.26±0.03）、（0.31±0.04），经统计学分析，差异有统计学意义（P 　　[关键词] miR-34a；人骨肉瘤；细胞生长 　　[中图分类号] R738.1 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2013）21-0023-02 　　众所周知，miRNA成为分子生物学研究热点，人类miRNA充当癌基因或抑癌基因的作用调控其靶基因的表达及相关信号通路，在肿瘤的发生、发展和转归过程中发挥重要作用[1，2]。miRNA参与个体发育、造血、脂肪代谢、器官生成以及细胞的增殖、分化、凋亡等活动，绝大多数癌基因或抑癌基因受到miRNAs分子的调控[3-6]。本文采用MTT技术探讨miR-34a在骨肉瘤中生物学功能和分子机制，为进一步阐明成骨肉瘤发生发展的分子机制提供理论依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验材料 　　1.1.1 细胞株 人成骨肉瘤MG-63细胞购自上海细胞生物学研究所。 　　1.1.2 试剂 MTT为Sigma产品，购自北京鼎国生物技术有限公司；miR-34a mimics与inhibitors购自上海吉玛生物技术有限公司；脂质体Lipo2000购自Invitrogen公司。 　　1.2 实验方法 　　1.2.1 细胞培养 MG-63细胞用DMEM培养基常规培养，取对数生长期细胞用于实验。 　　1.2.2 MTT比色法 为检测miR-34a对MG-63细胞生长增殖的影响，设计好实验组与对照组，每组设计重复孔3个，分别在转染各时间点后每孔加入配置好的MTT溶液20 μL，37℃培养4 h后倒掉培养基，每孔加150 μL二甲亚砜，静置或轻摇10 min，然后检测各孔的吸光度值。 　　1.2.3细胞转染 消化传代待细胞增长到70%～80%左右。准备好2.5 μL的脂质体Lipo2000与100 μL无血清MEM培养基充分混匀，然后静置15～20 min，分别用PBS与无血清MEM培养基洗涤细胞；一起加入96孔板中，然后按说明书操作。 　　1.3 统计学处理 　　所有数据均由SPSS 13.0软件进行处理???两组间比较采用t检验，P 　　[参考文献] 　　[1] Tang H，Liu X，Wang Z，et al. Interaction of hsa-miR-381 and glioma suppressor LRRC4 is involved in glioma growth[J]. Brain Res，2011，1390（1）：21-32. 　　[2] Saini S，Yamamura S，Majid S，et al. MicroRNA-708 induces apoptosis and suppresses tumorigenicity in renal cancer cells[J]. Cancer Res，2011，71（2）：6208-6219. 　　[3] Srivastava SK，Bhardwaj A，Singh S，et al. MicroRNA-150 directly targets MUC4 and suppresses growth and malignant behavior of pancreatic cancer cells[J]. Carcinogenesis，2011，32（18）：1832-1839. 　　[4] Ma L，Teruya-Feldstein J，Weinberg RA. Tumour invasion and metastasis initiated by microRNA-10b in breast cancer[J]. Nature，2007，449（7163）：682-688. 　　[5] Negrini M，Calin GA. Breast cancer metastasis： a microRNA story[J]. Breast Cancer Res，2008，10（2）：203. 　　[6] Zhu S，Wu H，Wu F，et al. MicroRNA-