MTHFR基因C667T多态性与动脉血栓性脑梗死关联性研究.docVIP

MTHFR基因C667T多态性与动脉血栓性脑梗死关联性研究 　　[摘要] 目的 研究亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）基因C667T多态位点对血浆同型半胱氨酸（Hcy）水平的影响及其与动脉血栓性脑梗死的相关性。 方法 选取年龄、性别及危险因素匹配的动脉血栓性脑梗死患者和对照组各84例，采用荧光定量法测定血浆Hcy水平，采用PCR-RFLP技术对MTHFR基因C667T位点进行分型。 结果 病例组和对照组中MTHFR基因C667T位点基因型TT携带者血浆Hcy水平显著高于基因型CC及CT携带者（病例组：t = 2.292，P = 0.024；对照组：t = 2.098，P = 0.039）。两组间基因型和等位基因频率分布差异无统计学意义（基因型：χ2=1.313，P = 0.519；等位基因：χ2=1.296，P = 0.255）。 结论 MTHFR基因C667T位点等位基因T可能与血浆Hcy水平升高有关，但等位基因T可能不是动脉血栓性脑梗死的主要危险因素。 　　[关键词] 亚甲基四氢叶酸还原酶；基因多态性；同型半胱氨酸；动脉血栓性脑梗死 　　[中图分类号] R743.33 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2013）17-0032-03 　　亚甲基四氢叶酸还原酶（methylenetetrahydrofolate reductase， MTHFR）基因C667T多态位点是脑梗死遗传易感性研究的主要候选基因之一，但研究结果存在差异[1，2]。越来越多学者提出研究差异与脑梗死异质性有关[3，4]。MTHFR基因C667T多态位点上等位基因T引起机体同型半胱氨酸（homocysteine，Hcy）水平升高，促进动脉粥样硬化形成。因此本研究以动脉血栓性脑梗死为研究对象，探讨MTHFR基因C667T多态位点与脑梗死的关联性及Hcy的中介作用。 　　1 对象与方法 　　1.1 研究对象 　　本研究病例组84例为顺德均安医院2011年2月～2012年8月住院患者，经颅脑CT检查，结合经颅多普勒、颈动脉与椎动脉彩超结果（均存在动脉粥样硬化斑块或狭窄），临床诊断动脉血栓性脑梗死。其中男60例，女24例，平均年龄（74.1±10.1）岁。对照组为同期门诊健康检查者，其中男56例，女26例，平均年龄（72.3±9.6）岁，排除既往脑卒中、冠心病、周围血管病、血液系统疾病、肝肾功能异常、严重感染及恶性肿瘤及2周内服用叶酸、B族维生素史者。入选对象均为本地汉族人群。两组间年龄、性别和危险因素组成无显著差异（表1）。本研究经顺德均安医院医学伦理委员会批准，所有对象均签署知情同意书。 　　1.2方法 　　1.2.1血浆Hcy水平测定 清晨空腹采集外周静脉血（病例组在起病后一周采血）4 mL，2%EDTA抗凝，离心后血浆与细胞沉淀分别用于Hcy水平测定和提取基因组DNA。采用荧光生化分析技术，使用Biotech公司的Hcy试剂盒测定血浆Hcy水平。 　　1.2.2基因分型 采用PCR-RFLP技术进行MTHFR基因C667T位点分型。引物序列P1：5’ -CAAAGGCCACCCCGAAGC-3’，P2：5’-AGGACGGTGCGGTGAGAGTG-3’[5]。PCR反应体系为15 μL，常规配制。反应条件：①94℃ 5 min；②94℃ 1 min；③64℃ 30 s；④72℃ 1 min；⑤返回34 个循环；⑥72℃ 5 min；⑦ 4℃ 保存。扩增产物于37℃恒温Hinf I酶切过夜。等位基因C未经酶切长为245 bp，等位基因T被酶切至173 bp及72 bp。2%的琼脂糖凝胶电泳检测基因型。纯合子CC型仅有245 bp条带，TT型显示173 bp和72 bp两条带，杂合子CT型则显示245 bp、173 bp和72 bp三条带。 　　1.3 统计学分析 　　计数资料采用χ2检验分析，正态分布计量资料中用均数和标准差描述、用t检验进行比较。所有数据统计均使用SPSS 11.0软件，以α = 0.05作为有无统计学意义的判断标准。 　　2 结果 　　2.1 血浆Hcy水平 　　84例病例组血浆Hcy水平（4.1～30.9）μmol/L，平均（12.70±4.30）μmol/L；84例对照组血浆Hcy水平（3.6～25.8）μmol/L，平均（12.73±4.48）μmol/L。参照美国心脏病学会标准（100 μmol/L重度升高），病例组轻度升高22例，中度升高1例，无重度升高病例；对照组轻度升高21例，无中度升高和重度升高病例。两组资料正态性检验P值均0.05。病例组与对照组间血浆Hcy水平差异无统计学意义，见表2。 　　2.2 MTHFR基因C667T多态位点对血浆Hcy水平的影响 　　病例