周建平－药品热原检查和细菌内毒素检查方法介绍.pptVIP

zjp-05-08 周建平 现任北京市药品检验所药理毒理室主任，主任药师。担任北京市高级专业技术职务评审委员、北京药理学会理事、中国药理学会药检药理专业委员会委员、第八界药典委员会委员。 周建平同志一直从事药品检验，尤其是药品的生物检定工作，工作中积累了较丰富的实践经验，代培了本单位和外单位多名进修人员，自担任科室主任以来主要负责科室的药品检验的技术把关工作，指导科室同志完成上级的检验任务，在工作中不断汲取药品检验领域的新知识，不断培养骨干力量，现在科室已拥有一批技术过硬的生物检定人员。本人多次承担中检所和药典会下达的复核任务、标定任务及注射剂标准提高的工作。作为北京市药监局药理毒理审评专家，经常参加新药审评工作，指导研究企业和本单位的科研和把关工作。 药品热原检查与细菌内毒素检查方法介绍 北京市药品检验所药理室 周建平 2008年4月 药品安全性检验内容 热原检查（Pyrogen Test) 细菌内毒素检查（Bacterial Endotoxin Test） 异常毒性检查 降压物质检查 过敏法反应检查法 降钙素生物测定法 生长激素生物测定法 溶血与凝聚检查法 热原检查（Pyrogen Test) 热原的含义 热原检查法基本原理 热原检查法基本操作 试验操作注意事项 热原的含义 热原系指某些药品中含有的能引起体温升高的杂质。 热原经静脉注入人体后15分钟即能产生强烈的发热反应，重者昏迷甚至危及生命。 热原主要来源于革兰阴性菌的细菌内毒素。 热原检查法基本原理 试验基本原理 家兔热原实验与人体的热原反应有什么样联系？ 1969年Greisman 和Hornick研究比较了三种纯化内毒素对家兔和健康男性志愿者的反应，结果表明：人和家兔产生热原反应需要大约相同重量的细菌内毒素，但当热原的剂量增加时，人体反应较家兔更为强烈。 热原剂量确定 实验的设计是基于在不超过10分钟的时间内，给予家兔静脉注射使动物能够耐受的，不多于10ml/kg体重剂量的受试药物。 《中国药品检验标准操作规程》2005版提出“ 供试品的剂量应按各该药项下的规定注射，未规定剂量的药品，可根据该药的药理性质，在不影响家兔正常生理的前提下，按体重计算（人按50kg计），用临床一次剂量的3-10倍” 家兔热原实验中的热原阈值剂量应当认为是最低标准，对于人体而言应尽可能的提高几倍实验的安全范围。 热原检查法基本操作 实验材料及设备 实验准备 实验动物 实验环境 供试液配制 实验材料及设备 计量设备（天平、公斤称等） 电热干燥箱（可达250℃以上） 恒温水浴（37～38 ℃） 家兔固定盒 热原测温仪或肛温计（测温探头或肛温计） 其它用品（7#针头、 12#针头、注射器、直镊、配制容器、灭菌注射用水、氯化钠注射液、酒精棉球等） 实验准备 热原测温仪或肛温计定期校验，符合计量认证的要求。 实验用具的除热原处理：试验用注射器、针头及一切与供试品溶液接触的器皿，洗涤，干燥， 250℃,30分钟以上。 实验动物 动物品系：均为远交系动物，普通级饲养。日本大耳白（Japanese White），新西兰白（New Zealand White），青紫蓝，比利时白（Belgian White），Chinchillas 和 Dutch Belts 要求：健康合格、1.7～3.0kg、同一来源和品系。 性别:雌雄均可。雌性动物，比较温顺，易于捉持，体重增长较缓慢 动物的检疫、标记：一周的检疫期，动物编号和笼具编号 实验环境 实验室温度： 17-25℃ 实验室与饲养室温差：≤ 5 ℃ 实验温度变化： ≤ 3 ℃ 实验室：保持安静，避免强光、噪音等刺激，注意实验兔之间相互影响。 供试液配制 1、固体样品注意称量、稀释时的操作，避免热 原和其它污染。 2、样品稀释时应注意准确性并尽量减少误差。 3、配制时应注意含量或效价(抗生素）的折算问题以及总量是否够试验之用。 4、稀释用的灭菌注射用水及氯化钠注射液宜经鲎试剂检查合格再用于稀释。 新兔预选 1、新兔→饲养7日以上 2、预测体温（条件同热原检查）：测温 8次、间隔0.5小时。 3、中选条件：体温在38.0～39.6 ℃， 8次测温变化≤ 0.4 ℃（可供3周使用） 实验兔重复使用 1、结果符合规定的实验兔，休息48hr 2、复试用兔升温＜0.6℃且供试品合格，休息48hr 3、使用次数未达10次的实验兔 4、复试用兔升温≥0.6℃且供试品合格，按新兔测温合格 （以上实验兔可重复使用） 5、结果不符合规定的实验兔 6、使用次数达10次的实验兔 （以上实验兔不可再使用） 家兔重复使用 美国药典27版仅仅规定了家兔使用频率，并没有规定年龄限制和重复使用