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碳水化合物的代谢试验 　　1．糖类发酵试验 　　原理：不同种类细菌含有发酵不同糖类的酶，因而对各种糖类的代谢能力也有所不同，即使能分解某种糖类，其代谢产物可因菌种而异。检查细菌对培养基中所含糖降解后产酸或产酸产气的能力，可用以鉴定细菌种类。 　　(2)方法：在基础培养基中加入~％的特定糖类。所使用的糖类有很多种，根据不同需要可选择单糖、多糖或低聚糖、多元醇和环醇等，见表6-4-1。将待鉴定的纯培养细菌接种入试验培养基中，置35孵育箱内孵育数小时到两周后，观察结果。若用微量发酵管，或要求培养时间较长时，应注意保持其周围的湿度，以免培养基干燥。 　　(3)结果：能分解糖产酸的细菌，培养基中的指示剂呈酸性反应，产气的细菌可在小倒管中产生气泡，固体培养基则产生裂隙。不分解糖则无变化。 　　(4)应用：糖类发酵试验，是鉴定细菌的生化反应试验中最主要的试验，不同细菌可发酵不同的糖类，如沙门菌可发酵葡萄糖，但不能发酵乳糖，大肠埃希菌则可发酵葡萄糖和乳糖。即便是两种细菌均可发酵同一种糖类，其发酵结果也不尽相同，如志贺菌和大肠埃希菌均可发酵葡萄糖，但前者仅产酸，而后者则产酸、产气，故可利用此试验鉴别细菌。 　　表6-4-1常用于细菌糖发酵试验的糖、醇类 　　单糖　　四碳糖：赤藓糖,五碳糖：核糖核酮糖木糖阿拉伯糖,六碳糖：葡萄糖果糖半乳糖甘露糖 　　双糖　　蔗糖乳糖　　麦芽糖 　　三糖　　棉子糖 　　多糖　　菊糖淀粉 　　醇类　　侧金盏花醇卫茅醇甘露醇山梨醇 　　非糖类　　肌醇 　　2．葡萄糖代谢类型鉴别试验 　　(1)原理：细菌在分解葡萄糖的过程中，必须有分子氧参加的，称为氧化型；能进行无氧降解的为发酵型；不分解葡萄糖的细菌为产碱型。发酵型细菌无论在有氧或无氧环境中都能分解葡萄糖，而氧化型细菌在无氧环境中则不能分解葡萄糖。本试验又称氧化发酵试验，可用于区别细菌的代谢类型。 　　(2)方法：挑取少许纯培养物接种2支HL培养管中，在其中一管加入高度至少为的无菌液体石蜡以隔绝空气，另一管不加。置35孵箱孵育48h以上。 　　(3)结果：两管培养基均不产酸为阴性；两管都产酸为发酵型；加液体石蜡管不产酸，不加液体石蜡管产酸为氧化型。 　　(4)应用：主要用于肠杆菌科与其它非发酵菌的鉴别。肠杆菌科、弧菌科细菌为发酵型，非发酵菌为氧化型或产碱型。也可用于鉴别葡萄球菌与微球菌。 　　3．甲基红试验 　　(1)原理：某些细菌在糖代谢过程中，分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸进一步被分解为甲酸、乙酸和琥珀酸等，使培养基pH下降至以下时，加入甲基红指示剂呈红色。如细菌分解葡萄糖产酸量少，或产生的酸进一步转化为其它物质，培养基pH在以上，加入甲基红指示剂呈桔黄色。 　　(2)方法：将待试菌接种于葡萄糖磷酸盐蛋白胨水中，35孵育48h~96h后，于5ml培养基中滴加5~6滴甲基红指示剂，立即观察结果。 　　(3)结果判定：呈现红色者为阳性，桔黄色为阴性，桔红色为弱阳性。 　　(4)应用：常用于肠杆菌科内某些种属的鉴别，如大肠埃希菌和产气肠杆菌，前者为阳性，后者为阴性。肠杆菌属和哈夫尼亚菌属为阴性，而沙门菌属、志贺菌属、枸橼酸杆菌属和变形杆菌属等为阳性。 　　4．β－半乳糖苷酶试验 　　(1)原理：乳糖发酵过程中需要乳糖通透酶和β－半乳糖苷酶才能快速分解。有些细菌只有半乳糖苷酶，因而只能迟缓发酵乳糖，所有乳糖快速发酵和迟缓发酵的细菌均可快速水解邻硝基酚-β-D-半乳糖苷而生成黄色的邻硝基酚。用于枸橼酸菌属、亚利桑那菌属与沙门菌属的鉴别。 　　(2)方法：将待试菌接种于ONPG肉汤中，35水浴或孵箱孵育18~24h，观察结果。 　　(3)结果：呈现亮黄色为阳性，无色为阴性。 　　(4)应用：可用于迟缓发酵乳糖细菌的快速鉴定，本法对于迅速及迟缓分解乳糖的细菌均可短时间内呈现阳性。埃希菌属、枸橼酸杆菌属、克雷伯菌属、哈夫尼亚菌属、沙雷菌属和肠杆菌属等均为试验阳性，而沙门菌属、变形杆菌属和普罗威登斯菌属等为阴性。 　　5．VP试验 　　(1)原理：测定细菌产生乙酰甲基甲醇的能力。某些细菌如产气肠杆菌，分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸进一步脱羧形成乙酰甲基甲醇。在碱性条件下，乙酰甲基甲醇被氧化成二乙酰，进而与培养基中的精氨酸等含胍基的物质结合形成红色化合物。即V-P试验阳性。 　　(2)方法：将待检菌接种于葡萄糖磷酸盐蛋白胨水中，35孵育24~48h，加入50g/Lα－萘酚，轻轻振摇试管，然后加400g/LKOH，轻轻振摇试管30s至1min，然后静置观察结果。 　　(3)结果：红色者为阳性，黄色或类似铜色为阴性。 　　(4)应用：主要用于大肠埃希菌和产气肠杆菌的鉴别。本试验常与MR试验一起使用，一般情况下，前者为阳性的细菌，后者常为阴性，反之亦然。但肠杆菌科细菌不一定都这样规律，如蜂房哈夫