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修改好的实验的方案2
大蒜素提取与抑菌试验方案
大蒜素液制备
提取
1 材料与方法
1.1材料
1.1.1菌种。金黄色葡萄球菌( Staphylococcus aureus) 大肠杆菌
1. 1. 2 培养基。
MH 肉汤培养基(购自上海顺勃生物工程技术有限公司)
营养肉汤培养基: 牛肉膏 3 g,蛋白胨 5 g,蒸馏水1 L;
牛肉膏蛋白胨培养基: 牛肉膏3 g,蛋白胨10 g,氯化钠5 g,蒸馏水 1 L。
1. 2 方法
(2)抑菌试验
1.2.2.菌悬液的制备。
1.金黄色葡萄球菌接种于牛肉膏蛋白胨培养基,
2.37 ℃培养 24 h,
3.用接种环挑取形态相似菌落 3 ~5个,接种于 4 ~5 ml 的水解酪蛋白( MH) 肉汤中 4.37 ℃孵育2 ~ 6 h,
增菌后的对数生长期菌液用生理盐水配制成吸光值( OD) 为 0.1 的菌悬液
使用时稀释 10 倍。
2不同温度、PH、蒜液浓度处理实验
2.1 不同温度蒜液抑菌效果比较
1、取蒜叶称 100g 10组,
2、加 100 ml 水分别于20℃、30℃、40℃、50℃、60℃、70℃、80℃、90℃、100℃蒸煮 30 min。
3、10组取出后分别3 500 r/min 离心 10 min,
取上层清液真空抽滤 2 次,收集滤液,过滤灭菌。
10 组大蒜液,每组每个温度分别进行抑菌圈试验。
作图:同一浓度同一PH下,不同蒜叶处理温度下的抑菌圈的大小。
2.2不同浓度蒜液抑菌效果比较
1、 取蒜粉称 100g 5 组,
2、加 100 ml 水100℃蒸煮 30 min 。
3、5 组取出后分别3 500 r/min 离心 10 min,
4、取上层清液真空抽滤 2 次,收集滤液,过滤灭菌。
5、5 组大蒜液再分别配成100%、80%、60%、40%、20% 的溶液,每组每个浓度分别进行抑菌圈试验。
6、作图:在同一个温度和PH下,不同蒜叶浓度处理的抑菌圈的大小。
2.3不同PH处理后的蒜液抑菌效果比较
1、取蒜粉称 100g 8 组,
2、加 不同PH值缓冲溶液处理,PH分别为2、3、4、5、6、7、8、9等8个PH梯度,
3、100℃蒸煮 30 min 。
4、8 组取出后分别3 500 r/min 离心 10 min,
5、取上层清液真空抽滤 2 次,收集滤液,过滤灭菌。8组大蒜液每组每个分别PH梯度进行抑菌圈试验。
6、作图:在同一个温度下,同一个浓度下,不同PH处理的蒜叶抑菌圈的大小。
1. 1. 3 试剂。
磷酸氢二钠,磷酸二氢钠(磷酸二氢钾)。
1.2.1 大蒜溶液与大蒜素的测定
取蒜叶称 10g,加 10 ml 磷酸盐缓冲液( pH 7.8) ,后3 500 r/min 离心 10 min,取上层清液真空抽滤 2 次,收集滤液,过 滤 法 灭 菌,备 用。用 定 硫 法 测 定大 蒜 素含量。
(1)大蒜素提取方案一——————定硫法
1 实验部分
1、1 测定原理
大蒜中蒜氨酸的亚砜基()SO+))和大蒜素的硫代亚砜基()SO+)S)被浓硝酸氧化成硫酸离子,
与氯化钡反应形成硫酸钡沉淀,根据硫酸钡的重量换算出大蒜素的含量。
1、2 试剂
硝酸(GR),10%氢氧化钠(AR),氯化钠(AR),甲基橙(AR)、硝酸银溶液15%氯化钡液,
1、3 测定方法
将蒜叶,准确称取5 g(精确至0.0001 g),
加浓硝酸3 ml~4 ml,用玻璃棒搅拌至黄色,放置20 min,
过滤并洗入100 ml容量瓶中,定容至刻度。
吸取滤液80 ml,放入150 ml烧杯中
,加0.1%甲基橙指示剂5滴,
滴加10%氢氧化钠溶液至黄色,用1:1盐酸调节pH=2~3之间。
在电炉上加热微沸,趁热加入10 ml 15%氯化钡液,搅拌均匀,
在90°水浴上保温2 h,
用定量(无灰)滤纸过滤,用热去离子水洗至无氯离子(滤液加硝酸银溶液不混浊为止),
将沉淀同滤纸放入预先恒重的瓷坩锅中,低温炭化,
再放入马弗炉(电炉)中600℃灼烧至恒重,取出冷却后称重。
式中:
32.06:硫分子量;
233.39:硫酸钡分子量
;m:硫酸钡重量;
162.26:大蒜素分子量;
m0:样品重量;
V0:提取液总体积;
V:测定提取液体积(ml)。
1.2.3 抑菌圈法测定抑菌效果试验。
用打孔器将滤纸制成直径为 6 mm 的小圆滤纸片
干热灭菌(?如何灭菌)
在无菌操作下,将滤纸片放入样液中,浸泡 0. 5 ~1.0 h。
吸取100 μl 菌悬液于 45 ℃ 左右的牛肉膏蛋白胨培养基, 15 ml 混合摇匀,倒入培养皿中冷却制成含菌平板
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