卫生毒理学及卫生化学学系2013.10.15.ppt

毒理学基础 首都医科大学 毒理学基础 首都医科大学 卫生毒理学与卫生化学学系2013.10.15 实习一 经口急性毒性实验 一、实验目的 （一）通过本次实验掌握经口灌胃技术，半数致死剂量的意义。 （二）通过本次实验学习半数致死剂量的计算及毒性判定。 二、测定方法 本实验以灌胃方式测定敌敌畏DDV（80g/100ml）的半数致死量（LD50）。 （一）实验动物与分组： 首选健康成年小鼠（18g～22g）和大鼠（180g ~ 220g）。 实验前动物要在实验环境中适应3 ~ 5 d 时间，以了解其正常活动情况和健康状况，并淘汰不健康或体重不符合要求的动物 。 本次实验取体重18 ~ 22 g 的小鼠，实验时，将小鼠称体重、编号、按随机分组原则，将实验动物分成5组，每组8只。 （二）剂量选择 首先查阅与受试化学物结构及理化性质相近似的化学物的LD50，以此值作为受试化学物的预期毒性中值，即中间剂量组，再上下各推1 ~ 2 个剂量组，进行预实验。 各剂量组的间距可根据LD50 计算方法要求按等比级数或等差级数安排。 本实验用机率单位法计算LD50，要求按等比级数排列，常用1：0.8，如敌敌畏的最高剂量为125 mg/kg，其次剂量组为125 mg/kg *0.8 = 100 mg/kg ，依次类推为80 、64 和51.2 mg/kg五个剂量组。 （三）受试化学物配制与稀释 1. 溶剂： 水溶性受试化学物以蒸馏水为溶剂配制成溶液。 脂溶性受试化学物以吐温-80、二甲基亚砜、植物油等配制。 （三）受试化学物配制与稀释 2. 受试物的稀释 等容量稀释法：各个剂量组的动物均给予相同单位体重体积的受试化学物，按照事先设计的剂量分别稀释配制为几种不同的浓度的受试物溶液。 例如本次实验五个剂量组: 各剂量组动物给予相同单位体重体积受试物均 为10ml/kg。 等容量稀释法 D：设计的染毒剂量， mg/kg V：动物给药量（相同单位体重体积）均为 10ml/kg X：各组需配制的受试物溶液的浓度（mg/ml） 如：第一组染毒剂量D = 51.2 mg/kg，动物按V = 10 ml/kg体重给药，配制的受试物浓度为X = 51.2 mg/10ml ， 依次类推：五个组所需配制的受试物浓度分别为 第一组：51.2 mg/10ml 第二组： 64 mg/10ml 第三组： 80 mg/10ml 第四组： 100 mg/10ml 第五组： 125 mg/10ml 各剂量组小鼠灌胃容量计算: 小鼠灌胃容量V ml = 体重（g）×10 ml/1000 g 各剂量组小鼠染毒剂量: 小鼠染毒剂量 = V ml ×各组的受试物浓度（mg/10ml) （四）灌胃方法： 小鼠灌胃法：左手拇指和食指捏住小鼠头部两耳后皮肤，无名指或小指将尾部紧压在手上，使小鼠腹部向上，尽量使其体位垂直，注意使动物的上消化道固定成一直线。右手持连着灌胃导针的注射器，将灌胃针由动物口腔侧插入，避牙齿，沿咽后壁缓缓滑人食管。若遇阻力，可轻轻上下滑动探索，一旦感觉阻力消失，即深入至胃部，一般进针深度小鼠2.5～4cm，随后将受试物溶液注入。如遇动物挣扎，应停止进针或将针拔出，千万不能强行插入，以免穿破食管，甚至误入气管，导致动物立即死亡。小鼠一次灌胃体积为10-20ml/kg （五）中毒体征和死亡情况观察 染毒后观察和记录中毒体征及出现的时间、死亡数量和时间及死亡前的特征。 高剂量组动物的死亡常很快发生，染毒后应即刻密切观察。 根据观察情况分析中毒特点和毒作用靶器官。 观察的项目包括： （1）中枢神经系统和神经肌肉系统：体位异常、叫声异常、不安、呆滞、痉挛、抽搐麻痹、运动失调、对外反应过敏或迟钝； （2）植物神经系统：瞳孔扩大或缩小、流涎或流泪； （3）呼吸系统：鼻孔流液、鼻翼煽动、血性分泌物、呼吸深缓、呼吸过速、仰头呼吸、； （4）泌尿生殖系统：会阴部污秽、有分泌物、阴道或乳房肿胀； （5）皮肤和毛：皮肤充血、紫绀、被毛蓬松、污秽； （6）眼：眼球突出、结膜充血、角膜浑浊、血性分泌物； （7）消化系统：腹泻、厌食。 三、LD50 计算 可采用多种方法测定LD50，有机率单位法、霍恩氏法、寇氏法等，机率单位法能计算出任何反应率水平的剂量，且实验2-5组均可。 机率单位法遵守的要求： 1. 剂量按等比级数排列，相邻两剂量组间的比值常用1：0.8 2. 各实验组动物数相等 机率单位法计算LD50公式（用五个剂量组时） X3 ----为第三个组的剂量对数（X3 = log 80，80 mg/kg） i-----为相邻两组剂量比值（以高剂量组为分子）的对数 i = log（125/100） y-----为死亡率相应的机率单位（查附表）