新编生物化实验讲义.doc

新编生物化学实验讲义 谢宁昌 刘洋 王桂兰 班级 学号 姓名 目录 页码 生化实验安排 2 实验一.粗脂肪的定量测定---索氏（SOXhlet）提取法 3 实验二.氨基酸的分离鉴定---纸层析法 5 实验三.血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳 7 实验四.蛋白质的定量测定---微量克氏（Kjeldahl）定氮法 8 实验五.紫外吸收法测定核酸的含量 12 实验六.酶活力测定 14 实验七.血糖的定量测定---Hagedorn-Juensen定糖法 17 实验八.米氏常数(Km)和最大反应速度(Vm)的测定 19 实验九.酶促反应进程曲线的制作和初速度的测定 23 生化实验室开放规则 实验计划 专业 学时数 人数 应做实验 地点：实验大楼404实验室 生物工程 40 190 1-9 制药工程 20 136 1、3、5、6、7 药物制剂 30 106 1、2、3、5、6、7、8 实验内容和管理实验员 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 实验 名称 粗脂肪的定量测定-索氏提取法 氨基酸的分离鉴定-纸层析法 血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳 蛋白质的定量测定-微量克氏定氮法 紫外吸收法测定核酸的含量 酶的活力测定 血糖的定量测定 米氏方程的确定 酶促反应进程曲线的制作和初速度的测定 耗时（hr） 4 6 4 6 4 4 4 4 4 专业 生工 药剂 制药 生工 药剂 生工 药剂 制药 生工 生工 药剂 制药 生工 药剂制药 生工 药剂 制药 生工 药剂 生工 操作台（个） 8 4 8 4 8 8 8 4 4 管理实验员 王浩琦 /王习霞 王桂兰 /唐开华 王桂兰 /唐开华 王浩琦 /王习霞 刘洋 /曹慧君 刘洋 /曹慧君 王浩琦 /王习霞 刘洋 /曹慧君 刘洋 /曹慧君 生化实验室的开放时间表 时间 节 星期一 星期二 星期三 星期四 星期五 上午 1-2 4-16周开放6hr/日 8:45±10分钟必须到实验室报到 3-4 4-16周开放6hr/日 10:15±10分钟必须到实验室报到 中午 午休 下午 5-6 4-16周开放6hr/日 13:30±10分钟必须到实验室报到 4-16周开放6hr/日 13:30±10分钟必须到实验室报到 7-8 4-16周开放6hr/日 13:30～15:30必须到实验室报到 4-16周开放6hr/日 14:15±10分钟必须到实验室报到 4-16周开放6hr/日 13:30～15:30必须到实验室报到 晚饭 晚上 9-10 11-12 加班人员 单周 唐开华/夏荣慧/顾永明 王浩绮/张玲/贺忠 王桂兰/张玲/周治 曹慧君/夏荣慧/梅艳珍 刘洋/张玲/王卫国 双周 王桂兰/夏荣慧/周治 王浩绮/张玲/贺忠 唐开华/张玲/顾永明 刘洋/夏荣慧/王卫国 曹慧君/张玲/梅艳珍 规则 1.同学们应至少提前2天到实验室预定或修改要做的实验，以便实验员做好准备，请大家务必不要按照讲课的顺序选实验，只要根据讲义和实验软件预习好了，就可来选做。实验大楼429实验室是多媒体实验室，为同学们准备好了生化实验讲义和生化实验软件，全天开放，欢迎大家前来预习。希望同学们尽量靠前安排做实验，不要拖到学期末。 2.一旦预定好了实验，就得守时，不许缺席，不许迟到，以免造成试剂浪费和影响下一轮同学做实验。请同学们务必在规定的时间内到实验室找管理实验员报到。报到时请出示预习报告，以便做完实验填上数据后立即交上。 3.实验前请注意看一下黑板的提示以及实验室内的有关标语。 4.实验1、3、5、6、7可各自同时开放8个操作台，实验2、4、8、9可各自同时开放4个操作台，每个操作台可容1组人做实验，每组1人。 实验一.粗脂肪的定量测定——索氏（SOXhlet）提取法 目的和要求 学习和掌握脂肪提取的原理和测定方法。 熟悉和掌握重量分析的基本操作。 原理 本法为重量法。用脂肪溶剂将脂肪提取后进行称量。该法适用于固体和液体样品。通常将样品浸于脂肪溶剂，如乙醚或沸点为30℃至60℃的石油醚，借助于索氏提取器进行循环抽提。用本法提取的脂溶性物质为脂肪类物质的混合物，其中含有脂肪、游离脂肪酸、磷脂、糖脂、固醇、芳香油、某些色素及有机酸等，称为粗脂肪。 用该法测定样品含油量时，通常采用沸点低于50℃的有机溶剂作为脂肪溶剂。此时，样品中结合状态的脂类(主要是脂蛋白)不能直接提