葡萄球菌1.ppt

食品金黄色葡萄球菌的检测 食品中微生物检测的一般方法 一、乳制乳制品微生物检测方法 牛乳中最常见的菌有：乳酸链球菌、乳酸杆菌、枯草杆菌。在牛乳卫生条件不良时，会发现一些致病菌如：大肠杆菌，变形杆菌、沙门氏菌、白喉杆菌等等。 乳制乳制品微生物检测方法 检样的采取和送检 1、散装或大型包装 用无菌工具采取不同部位具有代表性的检样，放入灭菌容器，立即送检 2、采样的数量、每批产品按千分之一采样，不足1千的抽一件。 二、肉类罐头的微生物检验 1、检样的采取和送检 在检查大批罐头食品时，根据商标、厂别、按品种、来源、批号及制造时间分别进行采样，采样数为1/3000。 罐头食品微生物污染的来源 罐头食品在加工过程中，为了保持产品正常的感官性状和营养价值，在进行加热杀菌时，不可能使罐头食品完全无菌，只强调杀死病原菌，产毒菌，实质上只是达到商业灭菌程度，即罐头内所有的肉毒梭菌芽胞和其它致病菌以及在正常的贮存和销售条件下能引起内容物变质的嗜热菌均被杀灭。 检样的处理和接种 将罐头编号后，先用75%的酒精棉，擦洗罐头表面，然后用95%酒精棉球点烧，将罐头的开口端烧灼灭菌后，再打开，除去表面，取样。取1G左右，分别加入下列各培养基中，亚硒酸增菌液，革兰氏阴性杆菌增菌液，葡萄糖肉汤，疱肉培养基，及生理盐水。 检验方法： 1在GN增菌液中，检查沙门氏菌。 2、在葡萄糖培养基中检查，葡萄球菌。 3、庖肉培养基，检查肉毒梭菌。 5、动物实验。 金黄色葡萄球菌是葡萄球菌属一个种。可引起皮肤组织炎症，还能产生肠毒素。如果在食品中大量生长繁殖，产生毒素，人误食了含有毒素的食品，就会发生食物中毒，故食品中存在金黄色葡萄球菌对人的健康是一种潜在危险，检查食品中金黄色葡萄球菌及数量具有实际意义。 对金黄色葡萄球菌的检测除一般的微生物生学检测方法，与免疫学检测方法外，凝固酶检测是最有效的方法之一。 金黄色葡萄球菌能产生凝固酶，使血浆凝固，多数致病菌株能产生溶血毒素，使血琼脂平板菌落周围出现溶血环，在试管中出现溶血反应。 操作步骤 1、样品的稀释 （1）固体和半固体样：称取25g固体样品，加入225mL无菌生理盐水，制成混悬液（操作过程要求无菌）。 （2）液体样品：吸取25ML至盛有225ML的生理盐水中，充分混匀。 操作步骤 2、增菌 （1）吸取5mL上述混悬液，接种于7.5%氯化钠肉汤或胰酪胨大豆肉汤50mL培养基内，置36±1℃温箱培养24h。 操作步骤 2、增菌 （2）挑取混悬液或液体样品直接在血平板和Baird-Parker平板划线分离。同时将对照菌种在上述两种平板上作划线分离接种。置36±1℃温箱培养24h。 金色葡萄球在Baird-Parker平板上，菌落呈灰色或黑色，在血平板上，形成菌落较大，金黄色（有时白色），有溶血圈。 操作步骤 3、检测 将上述血平板和Baird-Parker平板上挑取可疑菌落,先观察对照的菌落特征,再观察被检样品的菌落,并挑取可疑菌落在血平板上进行分离纯化。挑取可疑菌落及对照菌种进行革兰氏染色及血浆凝固酶试验。 血浆凝固酶试验 （一般的方法） 挑取上述可疑菌落菌种于肉浸液肉汤，同时将金黄色葡萄球菌接种于肉浸液肉汤，在36±1℃温箱培养24h后进行血浆凝固酶试验。  吸取1∶4新鲜兔血浆0.5mL，放入小试管中，再加入培养24h的金黄色葡萄球菌肉浸液肉汤培养基0.5mL，振荡摇匀，放在36℃温箱或水浴内，每0.5h观察一次，观察6h，如呈现凝固，即将试管倾斜或倒置时，呈现凝块者，被认为是阳性结果。同时以已知阳性和阴性葡萄球菌株及肉汤作为对照。 方法与步骤 取家兔血液8毫升，加入5%的柠檬酸钠溶液2毫升，混合后，以每一个分钟1500转的速度，离心深沉10分钟，吸取上层血浆供作试验。 在载玻片两端分别滴生理盐水各一滴，取被检查的培养物各一白金耳混释于生理盐水中，使成均匀悬液，然后向其中的一滴悬液内注加兔血浆一滴，并用白金耳将其混好，加外一滴细菌悬液不加血浆，作为对照。如血浆中的细菌发生凝块，即为阳性。 * *