β-淀粉样蛋白对在体大鼠海马LTD作用过程中对NMDA受体亚基NR2A所起的作用.ppt

β－淀粉样蛋白对在体大鼠海马LTD作用过程中对NMDA受体亚基NR2A所起的作用 研究背景及意义 研究目标 研究内容 拟解决的关键问题 拟采用的研究方法 数据分析 研究背景及意义 阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）俗称老年性痴呆，是一种以学习、记忆和注意力丧失，智力减退乃至完全痴呆为临床表现的神经系统退行性疾病。 近年来，随着老龄化社会的来临，AD发病率逐年增长，不仅严重影响老年人的寿命和生活质量，也给社会带来十分巨大的人力及财力负担。但是，AD的病因和发病机制迄今仍未彻底了解，更缺乏有效的治疗药物。 进一步研究NMDA受体亚基NR2A在AβP影响下在在体海马LTD过程的作用将有助于进一步揭示AβP的神经毒作用的具体机制，这将为保护神经元免受AβP毒性伤害提供可能的途径，并且为预防和治疗AD提供一定的理论基础。 研究目标 LTD的诱导和维持对AD的影响; NMDA受体亚基NR2A在大鼠在体海马长时程压抑过程中的作用; 进一步揭示AβP的神经毒作用的具体机制 研究内容 （1）通过水迷宫测定在体海马LTD的诱导和维持对大鼠学习、记忆的影响. （2）利用在体海马LTD测定技术观察： ①NR2A激动剂能否增强在体海马LTD的诱导和维持； ②NR2A抑制剂能否抑制在体海马LTD的诱导和维持； ③AβP片段能否抑制在体海马LTD的诱导和维持； ④同时给NR2A激动剂 和AβP是否有保护海马神经元LTD免受AβP毒性的作用； ⑤同时给NR2A抑制剂和AβP对LTD的抑制有无额外的衰减。 (3) 利用在体海马双脉冲易化(paired-pulse facilitation,PPF)测定技术观察以上五项是否通过NR2A起作用。 拟解决的关键问题 ①.NR2A激动药和NR2A抑制药在体给药的剂量，时间及途径 ②. 离体海马脑片的电位记录的准确测定 ③.提高在体海马LTD诱导的阳性率 拟采用的研究方法 本研究课题采用电生理在体海马LTD及PPF测定技术进行，具体实验方法及技术路线包括： (1)动物准备 (2)侧脑室导管埋置 (3)电极安装和定位 (4)刺激参数：刺激的频率为2 Hz,5串,串长60 s,串间隔60 s (5)脑室给药 (6)记录指标及实验内容 (7)实验分组及各组意义 用立体定位方法安装刺激电极和记录电极。 电极尖端位置的最后确定：实验结束后，用直流电进行组织毁损，福尔马林固定，切片后在显微镜下观察。 雄性Wistar大鼠200-250g，25%乌拉坦1.5g/kg腹腔麻醉，实验中，动物体温保持于37-38℃之间。在脑立体定位仪上将动物固定后，颅骨钻孔，以埋植脑室导管和插入电极。 将刺激诱发的群集性兴奋性突触后电位（population excitatory postsynaptic potential,pEPSP）经记忆示波器放大观察并储存后，用XY绘图仪打印输出。 ①比较低频刺激前后诱发电位活动以确定LTD的产生； ②脑室分别注射不同浓度Aβ，观察对LTD及PPF的影响； ③脑室分别注射不同浓度兴奋剂和抑制剂，观察对LTD及PPF的影响； ④脑室注射不同浓度兴奋剂对注射Aβ后的LTD及PPF的影响； ⑤脑室注射不同浓度抑制剂对注射Aβ后的LTD及PPF的影响； 第一部分： 分组： 1.生理盐水对照组 2.NM2A激动剂实验组 3.AβP实验组 4.AβP+NM2A激动剂实验组 5.NM2A抑制剂实验组 6. AβP+NM2A抑制剂实验组 各组比较的意义及预期结果： 1.和2.：观察不同浓度NM2A激动剂对LTD的影响。 1.和3.：观察AβP对LTD诱导及维持的抑制作用。 3.和5.：观察AβP和NM2A抑制剂对LTD的抑制作用是否具有类似的变化和动力学作用。 3.和4.：观察NM2R激动剂预处理能否使LTD免受AβP的影响。 3.和6及5.和6： 观察AβP和NM2A抑制剂对LTD的抑制作用是否叠加。 第二部分： 分组及各组的比较同第一部分相似，只是指标换成了PPF，来验证NR2A激动剂能使LTD免受AβP的毒性作用是否通过了突触前机制。 数据分析 统计LTD斜率（幅度）变化百分比作为纵坐标，时间为横坐标，观察AβP、NR2A激动剂及NR2A抑制剂对LTD的影响； 统计PPF二峰的比值的变化作为纵坐标，时间为横坐标，观察AβP、 NR2A激动剂及NR2A抑制剂的作用。 实验结果以Mean±SD表示，以组间t检验作统计学处理，P0.05被认为有统计学差异。 * * *