《病毒学总论》ppt课件.ppt

3.组织培养法 (tissueculture) 或细胞培养 (cellculture)法 是将离体活组织块或分散的组织细胞加以培养的技术总称，为病毒分离鉴定中的最常用的基本方法。 细胞的变化 有些病毒在细胞内增殖时可引起特有的细胞病变，称为细胞病变效应 (cytopathic effect，CPE)。常见的变化有细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落等。 有些病毒如麻疹病毒、CMV、RSV等 作用于细胞膜，可使邻近的细胞相互融合，形成多核巨细胞或称融合细胞。 有些病毒 (如狂犬病病毒、麻疹病毒等) 可在培养细胞中形成胞浆或核内的包涵体。 病毒在培养细胞中增殖的指标 病毒培养时出现的CPE 2.红细胞吸附 (hemadsorption,HAd) 流感或副流感病毒等感染细胞后，由于细胞膜上出现了血凝素(haemagglutinin,HA)，具有吸附脊椎动物 (豚鼠、鸡、猴等) 红细胞的能力，这一现象称红细胞吸附，常用来测定具有HA的粘病毒与副粘病毒的增殖。若有相应的抗血清，则能中和细胞膜上的HA，HAd不再发生，称红细胞吸附抑制试验。 3.干扰现象(interference) 某些病毒感染细胞时不出现CPE或其他易于测出的变化(如HAd)，但能干扰在其后感染的另一病毒的增殖。如风疹病毒感染Vero细胞时CPE不明显，但它能干扰后感染的埃可病毒 (ECHOV) 的增殖，从而阻抑后者所特有的CPE。 4.细胞代谢的改变 病毒感染细胞的结果可使培养液的pH值改变，说明细胞的代谢在病毒感染后发生了变化。这种培养环境的生化改变也可作为判断病毒增殖的指标。 病毒的数量与感染性测定 空斑形成单位（Plaque Forming Unit，PFU） 限于用在有产生空斑能力的病毒。 测定单层细胞培养中病毒裂解空斑的形成。 50%组织细胞感染量（50% tissue culture infectious dose，TCID50） 引起50%鸡胚、动物死亡或50%的培养细胞发生CPE的最小病毒量。 （三）病毒感染的血清学诊断 原理是用已知病毒抗原来检测病人血清中有无相应抗体，故须待病人感染后体内产生抗体时才能检出。 另外，在采取临床标本及病人血清应注意病程，必须采取患者急性期血清与恢复期血清 (双份血清) 进行血清学试验。若第2次血清抗体滴度比第1次高出4倍以上时，才有诊断意义。 （四）病毒感染的快速诊断 快速诊断主要是指从含有病毒标本及感染机体的血清中检测病毒颗粒、蛋白抗原、IgM抗体和核酸等，往往在数小时内即可得出结果。 形态学检查 1.电镜和免疫电镜检查 2.普通光学显微镜检查 有些病毒在宿主细胞内增殖后，在细胞的一定部位(胞核、胞浆或两者兼有) 出现一个或数个、圆形或椭圆形、嗜酸性或嗜碱性的结构，即包涵体。包涵体对病毒感染的诊断有一定价值。 病毒蛋白抗原检查 用荧光素、放射性同位素、过氧化物酶等标记抗体，采用免疫学和分子生物学技术，检测标本中的病毒蛋白抗原，具有敏感、特异、快速等优点。 1.免疫荧光技术 (immunofluorescence,IF) 2.固相放射免疫测定 (solid-phase radioimmunoassay,SPRIA) 3.酶免疫技术 (enzyme immunoassay,EIA)此法可检测多种病毒及其抗体，主要是酶免疫组化法和酶联免疫吸附试验法(ELISA)。 特异性IgM抗体的检测 检测病毒特异性IgM抗体可诊断急性感染，特别是对证实孕妇感染风疹病毒尤为重要，但应注意类风湿因子 (IgM) 的干扰。另外，检测早期抗原的抗体是快速诊断的另一途径。如检测针对EBV的早期抗原(EA)、核心抗原 (EANA) 和衣壳抗原 (VCA) 等的抗体，可以区别急性或慢性EBV感染。此外，分子生物学检测技术、气相色谱技术等，均可用来分析和鉴定病毒感染。 检测病毒核酸 1.核酸杂交技术 用于病毒检测的有斑点杂交、细胞内原位杂交 、DNA印迹杂交、RNA印迹杂交等。 2.核酸扩增法 目前多数病毒基因已通过分子克隆技术被明确了核苷酸序列，使得DNA扩增技术逐步发展为常规诊断技术之一。 3.基因芯片技术 病毒的快速诊断 光镜-----包涵体 电镜 免疫荧光 ELISA 分子生物学技术 杂交 Southern blot PCR Northern blot 二、 病毒感染的防治 免疫预防 人工主动免疫 灭活疫苗： 乙脑疫苗 狂犬疫苗 流感灭活疫苗 HAV等 减毒活疫苗： 脊髓灰质炎疫苗 麻疹疫苗 腮腺炎疫苗 风疹疫苗 HAV疫苗 其他疫苗：基因工程疫苗，核酸疫苗 ，亚单位疫苗等 药物防治 金刚烷胺-------抑制病毒