食用菌生产技术食用菌菌种的退化、复壮和保藏.ppt

第七节 菌种的退化、复壮和保藏 (104-106页） 食用菌菌种是一类重要的自然资源。 优良的菌种被分离选育出来后，就必须采 用适当的保藏方法尽可能地保持其原来的性 状。防止菌种退化，以便随时为科研和生产提 供菌种服务。 1、退化的现象 ①菌落和细胞形态改变 ②生产能力的下降 ③对生长环境的适应能力减弱 2、退化的原因 ①基因的自发突变 ②育种后未经很好的分离纯化 ③培养条件改变 ④污染杂菌 3、防止退化的措施 ①控制传代次数（一般在DNA的复制过程中，碱基的错配率是5×10-4，自发突变的频率为10-8～10-9，采用良好的菌种保藏方法，可以减少移种和传代的次数） ②创造良好的培养条件 ③利用不同类型的细胞进行移种传代。对丝状微生物而言，通常采用稳定的单核孢子进行接种。 ④采用有效的菌种保藏方法 复壮——狭义的复壮是指在菌种已发生衰退的情况下，通过纯种分离和生产性能测定等方法，从衰退的群体中找出未衰退的个体，以达到恢复该菌原有典型性状的措施； 广义的复壮是指在菌种的生产性能未衰退前就有意识的经常、进行纯种的分离和生产性能测定工作，以期菌种的生产性能逐步提高。实际上是利用自发突变（正变）不断地从生产中选种。 1、纯种分离 菌落纯的分离方法（平板表面涂布法，平板划线分离法，琼脂培养基浇注法） 细胞纯的分离方法（分离小室进行单细胞分离，显微操纵器进行单细胞分离，菌丝尖端切割法进行单细胞分离） 2、通过宿主体内生长进行复壮(即寄主复壮，如段木接种) 3、淘汰已衰退的个体(即遗传育种) 以退化菌株作为出发菌株,重新进行遗传育种,从中选出高产菌株; 采用比较激烈的理化条件进行处理，以杀死生命力较差的已衰退个体 菌种保藏机构的任务：广泛收集实验室和生产菌种、菌株（包括病毒株以及动、植物细胞株和质粒等）的基础上，使之达到不死、不衰、不乱以及便于研究、交换和使用的目的。 常用的菌种保藏机构： 中国微生物菌种保藏委员会(CCCCM) 美国的典型菌种保藏中心(ATCC) 近处的菌种保藏机构 河南农科院 河南农大农学院 华中农大真菌所 山东金乡食用菌厂 山东莱阳食用菌厂 当地的农科所 挑选典型菌种的优良纯种 一般采用微生物的休眠体（如孢子、芽孢） 创造适于微生物长时期休眠的环境条件 如干燥、低温、缺氧、避光、缺乏营养以及 添加保护剂或酸碱中和剂等 菌 连续在培养基上（内）移种 种 生活态 传代培养保藏法 连续在活宿主上（内）移种 保 固体斜面 藏 湿法 半固体琼脂柱 方 休眠态 液体介质（蒸馏水、糖液、其它溶液） 法 干法 藏在玻璃管内 吸附在合适的载体上 干法保藏菌种的方法 滴入小试管（在放入大试管干燥器中） 藏在玻璃管内 封入安培瓶 菌液直接真空干燥法（L-干燥法） 冷冻真空干燥法 细粒状载体（土壤、沙粒、土壤+沙粒） 球块状载体（硅胶、瓷球） 合适的载体 有机基质（曲料、麦粒） 滤纸片 薄片状载体 明胶小片（滴在蜡纸板上干燥而成） 血清蛋白小片（…乙烯薄膜… ） 四、菌种保藏的注意事项 （1）挑选优良性状 （2）控制保藏条件 （3）控制转代次数 （4）用同一培养基进行活化 （5）严格无菌操作 再见！ * * * * * 一、菌种的退化 3、防止菌种