222动物细胞的融合与单克隆抗体.ppt

阳性孔 方法——抗原-抗体杂交法 在单克隆抗体制备过程中，两次筛选的原理和方法是不相同的。 * ⑻如何得到大量的单克隆抗体？ 体内培养 体外培养 单克隆抗体 ——化学性质单一、特异性强 * 注射抗原 效应B细胞 骨髓瘤细胞 融合 多种杂交细胞 选择性培养基 筛选1 抗原-抗体杂交法 克隆化 单克隆抗体 筛选2 4.第一次筛选出的杂交瘤细胞为何需进行克隆化培养和专一抗体检测？ * * 单克隆抗体 筛选 杂交细胞 杂交瘤细胞 体外或体内 细胞培养 筛选 骨髓瘤 细胞 诱导细胞融合 特异性杂交瘤细胞 杂交瘤细胞系 提取 经过免疫的 B淋巴细胞 动物细胞融合技术 动物细胞培养技术 单克隆抗体的制备过程： 特点：既能产生专一抗体又能大量繁殖 特点：特异性强灵敏度高可大量制备 注射抗原 免疫 * 7、单抗隆抗体的应用 ①作为诊断试剂 ②定位诊断肿瘤、心血管畸形等疾病 用于体外诊断人类和动植物疾病及病原鉴定，纯度高、特异性强，具有准确、高效、简易、快速的优点。 ③用于治疗疾病和运载药物 利用同位素标记单抗，在特定组织成像 制成生物导弹，将药物定向带到癌细胞所在的位置，在原位杀死癌细胞，疗效高、副作用小。 单克隆抗体的优点： 特异性强，灵敏度高，并可以大量制备。 * * * ⑵用于治疗疾病和运载药物 ①特异性强、灵敏度高 生物导弹——单克隆抗体＋抗癌药物 ②疗效高、毒副作用小 结合同位素的单抗 -----生物导弹 * 结合同位素的单抗 -----生物导弹 单抗 放射性同位素 * 项目 动物细胞融合 植物体细胞杂交 原理 细胞膜的流动性 细胞膜的流动性和植物细胞的全能性 融合前提 分散成单个细胞 去除细胞壁 诱导方法 聚乙二醇、离心、振动、电激、灭活病毒 聚乙二醇、离心、振动、电激、 结果 获得杂种细胞或细胞产物 获得杂种植株 用途 制备单克隆抗体 培育作物新品种 意义 使远缘杂交成为可能 克服远缘杂交障碍 * 对比 比较项目 植物体细胞杂交 单克隆抗体的制备 原理 融合前处理 促融方法 　　 用途 过 程 第一步 第二步 第三步 第四步 细胞膜的流动性、细胞的全能性 细胞膜的流动性、细胞增殖 酶解法去壁 小鼠要免疫处理 物理法　化学法 物理、化学、生物法 原生质体的制备 融合亲本细胞的准备 原生质体的融合与筛选 动物细胞融合与两次筛选 杂种细胞的形成与培养 对产生特定抗体的杂交瘤细胞培养 杂种植株的鉴定 单克隆抗体的分离提纯 单抗有助于疾病的诊断、治疗 获得具优良性状的杂种植株 * 动物细胞工程小结 动物细胞培养：原理、营养、条件、过程、细胞生长特点、结果、应用 动物细胞融合：原理、诱导方法、过程、应用 单克隆抗体的制备：原理、过程、特点、应用 核移植与克隆动物：供体、受体、核移植方法、克隆动物的方法、克隆动物的遗传特性、应用 动、植物细胞工程的比较：植物组培技术与动物细胞培养技术、植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术 * ⑶图中B为________过程， 常用_________作为诱导剂 ，该细胞继承___________的遗传特性，既能__________,又能___________ 。 B 体外培养 骨髓瘤细胞 杂交瘤细胞 足够数量的细胞群 注射到 小鼠腹腔 A C 1.下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的抗体实验方案 ⑴该实验方案的 目是 ； ⑵A是从小鼠的脾脏中取得_______,该细胞能够产生 ； 制备单克隆抗体 B细胞 专一抗体 细胞融合 灭活病毒 双亲细胞 分泌专一抗体 无限增殖 * 单克隆抗体的制备 1、怎样获得能分泌专一抗体的B淋巴细胞？ 2、从何处获得较多的B淋巴细胞？ 3、用什么方法可以使B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合？ 4、怎样筛选出杂交瘤细胞？ 5、筛选出的杂交瘤细胞产生的抗体都一样吗？ 6、怎样获得只产生特异性抗体的杂交瘤细胞？ 7、怎样获得大量的单一抗体？ 反复注射特定的抗原，免疫小鼠。 小鼠的脾脏 PEG、灭活的病毒等 利用HAT选择培养基培养，筛选 否 用多孔细胞培养板培养，稀释度要保证每个孔内不多于一个细胞。 抗原抗体杂交法检测——呈阳性反应 体内或体外大量培养特异的杂交瘤细胞，从中提取单一抗体。 * 单克隆抗体 筛选 杂交细胞 杂交瘤细胞 体外或体内 细胞培养 筛选 骨髓瘤 细胞 诱导细胞融合 特异性杂交瘤细胞 杂交瘤细胞系 提取 经过免疫的 B淋巴细胞 动物细胞融合技术