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1. (2012·江苏高考)图1表示含有目的基因D的DNA片段长度(bp即碱基对)和部分碱基序列,图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4种限制性核酸内切酶,它们识别的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。请回答下列问题:(1)图1的一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由 连接。(2)若用限制酶SmaⅠ完全切割图1中DNA片段,产生的末端是 末端,其产物长度为 。(3)若图1中虚线方框内的碱基对被T-A碱基对替换,那么基因D就突变为基因d。从杂合子中分离出图1及其对应的DNA片段,用限制酶SmaⅠ完全切割,产物中共有 种不同长度的DNA片段。(4)若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行连接,形成重组质粒,那么应选用的限制酶是 。在导入重组质粒后,为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌,一般需要用添加 的培养基进行培养。经检测,部分含有重组质粒的大肠杆菌菌株中目的基因D不能正确表达,其最可能的原因是: 2. (2013·靖江模拟)许多大肠杆菌的质粒上含有lacZ基因,其编码的产物β-半乳糖苷酶在X-gal和IPTG存在下,可以产生蓝色沉淀,使菌落呈现蓝色,否则菌落呈现白色。基因工程中常利用该原理从导入质粒的受体细胞中筛选出真正导入重组质粒的细胞,过程如图所示。请据图回答:(1)基因工程中,构建基因表达载体的目的是 。(2)限制酶EcoRⅠ的识别序列和切割位点是-G↓AATTC-,SmaⅠ的识别序列和切割位点是-CCC↓GGG-。图中目的基因被切割下来和质粒连接之前,需在目的基因的右侧连接相应的末端,连接的末端序列是 ,连接过程中需要的基本工具是 。(3)转化过程中,大肠杆菌应先用 处理,使其处于能吸收周围DNA的状态。(4)菌落颜色为白色的是 ,原因是 。(5)菌落③中的目的基因是否表达,可采用的检测办法是 。3. 现代生物技术并不是各自独立的,而是相互联系、相互渗透的。如图表示利用乳腺生物反应器生产某种动物蛋白的流程示意图,请分析回答:(1)该生产流程中应用到的现代生物技术有 、 。(写出其中两种)(2)图中A、B分别表示 、 。(3)为提高培育成功率,进行②过程之前,对早期胚胎的处理是取其部分细胞用目的基因探针进行 检测,对受体动物的处理是用 进行同期发情处理。(4)蛋白质工程中,要对蛋白质结构进行设计改造,必须通过基因修饰或基因合成来完成,而不直接改造蛋白质,原因是 。4. 胰岛素可以用于治疗糖尿病,但是胰岛素被注射到人体后,会堆积在皮下,要经过较长的时间才能进入血液,而进入血液的胰岛素又容易分解,因此,治疗效果受到影响。如图是用蛋白质工程设计速效胰岛素的生产过程,请据图回答有关问题:(1)构建新的蛋白质模型是蛋白质工程的关键,图中构建新的胰岛素模型的主要依据是 。(2)通过DNA合成形成的新基因应与 结合后转移到 中才能得到准确表达。(3)若要利用大肠杆菌生产速效胰岛素,需用到的生物工程有 、 和发酵工程。(4)图中从新胰岛素模型到新的胰岛素基因合成的基本思路是什么? ? 。5.(2012·新课标全国卷)根据基因工程的有关知识,回答下列问题:(1)限制性核酸内切酶切割DNA分子后产生的片段,其末端类型有 和 。(2)质粒载体用EcoRⅠ切割后产生的片段如下: AATTC……G G……CTTAA为使载体与目的基因相连,含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外,还可用另一种限制性核酸内切酶切割,该酶必须具有的特点是 。(3)按其来源不同,基因工程中所使用的DNA连接酶有两类,即 DNA连接酶和 DNA连接酶。(4)反转录作用的模板是 ,产物是 。若要在体外获得大量反转录产物,常采用 技术。(5)基因工程中除质粒外, 和 也可作为载体。(6)若用重组质粒转化大肠杆菌,一般情况下,不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体细胞,原因是 。6. (2012·福建高考)肺细胞中的let-7基因表达减弱,癌基因RAS表达增强,会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实现表达,发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图1所示: (1)进行过程①时,需用 酶切开载体以插入let-7基因。载体应有RNA聚合酶识别和结合的部位,以驱动let-7基因转录,该部位称为 。(2)进行过程②时,需用 酶处理贴附在培养皿壁上的细胞,以利于传代培养。(3)研究发现,let-7基因能影响癌基因RAS的表达,其影响机理如图2所示。据图分析,可从细胞中提取 进行分子杂交,以直接检测let-7基因是否转录。肺癌细胞增殖受到抑制,可能是由于细胞中 (RAS mRNA/RA
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