实验1大肠杆菌的培养和分离ppt课件.pptVIP

（五）斜面接种及菌种保存 主要器具： 操作过程：在无菌操作下，用接种环挑取___菌落， 再用划线法（自斜面底部向上轻轻划直线）接种 在_____上， _____℃恒温培养箱中培养____小时 后，____℃ 冰箱保存。 无菌操作：同前 试管斜面培养基密闭效果比平面的好很多,不容易 进入杂菌，同时能用来做纯细菌的长期保存。 思考：菌种保存为何采 用斜面而不是平板？ 接种环、恒温箱、冰箱 单 斜面 ３７ ２４ ４ 思考题？ 利用培养基技术不仅可以分离微生物，也可以进行植物组织培养。请简要说明这两项技术应用设计思路的相同点以及区别。 相同点：都是从培养对象所需的营养条件出发， 配置适宜培养基。都要求严格的无菌条件。 不同点：植物组织培养往往还要加入激素。 实验一 大肠杆菌的培养和分离 实验步骤： 一 配制LB培养基 溶解 计算称量 调pH 分装 加塞，包扎 灭菌 二 倒平板、制斜面 三 大肠杆菌的培养 三 大肠杆菌的分离 平板划线分离法（或稀释涂布分离法） 使所需细菌大量繁殖 获得单菌落，纯化菌株 四 斜面接种培养 目的菌株的纯培养和菌种保存 说明： （1）分布、与人类的关系、应用。注：EcoRⅠ来源于大杆菌E.coli的RY13菌株,即课本的实例。 （2）回顾细菌的基本结构。（拟核、质中的核糖体和质粒（或重组质粒）、膜、壁） （3）简单说明革兰氏染色法 微生物形体微小，要观察个体形态结构要借助于光学显微镜或电子显微镜。 细菌的细胞极其微小又十分透明，因此在光镜下进行观察时只能看到其大体的形态和运动情况。若要在光镜下观察其细致形态和主要构造，一般要对它们进行染色。染色法很多，其中最重要的是革兰氏染色法（以创立者丹麦医生的名字命名）。结果被染成紫色的是为阳性，被染色成红色的为阴性，分别称为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。 （3）副板书适当拓展细菌的代谢类型，具体见下张隐藏幻灯片。 细菌菌落特征：表面一般是光滑湿润的，有粘稠性，多数是透明或半透明 酵母菌菌落特征：表面光滑而湿润，有粘稠性，但大多呈乳白色，少数呈红色 放线菌菌落特征：由于有纤细的菌丝课产生孢子，所以表面时紧密的绒状，坚实多皱，长孢子后就成粉末状。由于菌丝和孢子有多种色素，所以在菌落培养基底部和菌落表面都有不同的颜色。 【承接】菌落难以辨认时，可借助显微镜观察。 固体培养基用于菌种保存及分离、鉴定菌落、活菌计数等，半固体培养基可观察微生物的运动，液体培养基常用于发酵工业。 设疑： 有哪些灭菌方法？分别适用于哪些物体的灭菌？原理是什么？ 高压蒸汽灭菌时要注意什么？（各种物品需用牛皮纸或报纸包好。器皿要封口：试管要加盖或棉花寨封好；三角瓶口用封口膜或6层纱布封口，再用牛皮纸或报纸封口；移液管上端也用棉花寨封好再用牛皮纸包好。 灭菌后，通常将实验用具放入60℃~80 ℃烘箱中烘干，以除去灭菌时的水分，避免引起污染。 ） 当我们需要研究或利用某种微生物时，首先需要对该种微生物进行培养。微生物种类多种多样常常混杂在一起，我们就需要从中分离出我们所需要的菌种或菌株。所以微生物的培养和分离是微生物研究过程中最基本的实验技术。 实验1： 大肠杆菌的培养和分离 大肠杆菌（E.coli） 分布：人和哺乳动物肠道，此外还广泛分布于水、 污水、土壤、谷类、乳制品等当中。 大肠杆菌在人体的_____中一般对人体无害，但任何 大肠杆菌如果进入__________都会对人体产生危害。 大肠杆菌是_______工程中被广泛采用的工具。 肠道 泌尿系统 基因 革兰氏______（填阴或阳）性菌 阴 代谢类型： 异养，兼性厌氧型 生长适宜温度： 质粒、 EcoRⅠ限制酶、 E.coli-DNA连接酶、 受体细胞 37℃左右 易培养、生活周期短等特点。 细菌的代谢类型 自养型细菌 异养型细菌: 光合自养型: 化能自养型: 大部分腐生菌和寄生菌 如蓝细菌 如硝化细菌 1、同化作用类型 2、异化作用类型 需氧型细菌 厌氧型细菌 兼性厌氧型细菌 大多数细菌 如破伤风杆菌 如酵母菌、大肠杆菌。 大肠杆菌属于异养、兼性厌氧型细菌 大肠杆菌 酵母菌 放线菌 霉菌 菌落：单个或少数细菌在固体培养基上大量生长繁殖时，所形成的肉眼可见的具有一定形态结构的子细胞群体。 不同微生物形成的菌落具有不同 的特征，是鉴定菌种的重要依据。 如菌落的大小、形状、边缘、光泽度、颜色、透明度等。 菌落的概念 白色或乳白色，光滑 大肠杆菌菌落： 二、 培养基 不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方 3、调节pH 1、培养基的种类 2、成分 水、碳源、氮源、 无机盐、生长因子 (生长因子即细菌生长必需，而自身不能合成的 化合物,如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶) 真菌：5～6 细菌：6.5 ～ 7.5 4、有时会加一定量的氯化钠以维