寄生虫实验技术ppt课件.ppt

免疫酶染色试验 免疫酶染色试验是以组织切片，印片或培养物涂片用作待检材料进行过氧化物酶特异免疫染色，在光镜下检示样本的特异性抗原。 在蠕虫和原虫感染中均有应用。血吸虫病、丝虫病、囊虫病、华支囊吸虫病、肺吸虫病、包虫病和弓形虫病等。 单克隆抗体 单克隆抗体（McAb）广泛用于寄生虫病临床与实验研究。分型和鉴定；免疫诊断方法以及寄生虫感染免疫，保护性免疫和虫苗制备等方面。 用于疟疾、弓形虫病、血吸虫病、肺吸虫病、棘球蚴病、丝虫病等方面。 检测新技术－分子生物学方法 免疫印渍试验 DNA探针技术 PCR技术 免疫印渍试验 免疫印渍试验是由十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS－PAGE），电泳转印及标记免疫试验三项技术结合而成的一种新型的免疫探针技术，是分析蛋白抗原、鉴别生物学活性抗原组分的有效方法。 应用于检测寄生虫感染宿主体液内针对某抗原的抗体，是一项高敏感和高特异的诊断方法，具有很大发展潜力。 DNA探针技术 DNA探针技术，又称核酸分子杂交技术，敏感性高，特异性强，应用面广。 在寄生虫病诊断中，探针是病原体的特异核酸序列，可用来检测出病原体是否存在。 在寄生虫病的诊断、现场调查、寄生虫种的鉴定及分类等方面的研究中均已使用。 PCR技术 检测病原体遗传物质用以诊断寄生虫病的方法，聚合酶链反应（polymerase ? chain? reaction，PCR）是一种体外扩增特异性DNA技术。 现已使用PCR技术于寄生虫病诊断，如锥虫病、利什曼病、肺孢子虫病、肠球虫病、贾第虫病、弓形虫病等。 寄生虫实验技术 病原学检查 血清学检查 病原学检查 粪便检查 血液检查法 排泄物与分泌物等的检查 其它组织器官检查 粪便检查 直接涂片法 厚涂片透明法 浓聚法 沉淀法 毛蚴孵化法 浮聚法 肛门拭子检查法 试管滤纸检查法 虫卵计数法 定量透明法 淘虫检查法 带绦虫孕节检查法 直接涂片法 检查蠕虫卵、原虫包囊和滋养体。 简便，连作3次以提高检出率。 滴一滴生理盐水于载玻片，用牙签挑取绿豆大小的粪块，在生理盐水中涂抹均匀；厚度以可辨认下面的字迹为宜。也可固定后染色。一般在低倍镜下检查，用高倍镜观察时加盖片。 检查包囊时用碘液。 检查隐孢子虫卵囊时用金胺酚改良抗酸染色法。 厚涂片透明法 取约5mg粪便，置于载玻片上，覆以浸透甘油－孔雀绿溶液的玻璃纸片，轻压，使粪便铺开。置于30～36℃温箱中约半小时或25℃约1小时。待粪膜稍干，即可镜检。 沉淀法 原虫包囊和蠕虫卵等比重大时效果较好。 重力（离心）沉淀法：取粪便20～30g，加水混悬后用2～3层湿纱布过滤；滤液静置25分钟或离心（1500～2000rpm）1～2分钟，重复洗涤直至上清液清澈为止。最后取沉渣涂片镜检。 检查包囊时，换水间隔时间宜延长至约6h。 浮聚法 利用比重较大的液体，使原虫包囊或蠕虫卵上浮，集中于液体表面。检查钩虫卵效果最好。 饱和盐水浮聚法：取黄豆粒大的粪便置于浮聚瓶中，加入少量饱和盐水调匀，再慢慢加入饱和盐水到液面略高于瓶口但不溢出为止。在瓶口覆盖一载玻片，静置15分钟后，将载玻片迅速提起翻转，镜检。 可用硫酸锌或蔗糖代替饱和盐水。 毛蚴孵化法 在适宜温度的清水中，血吸虫卵内的毛蚴短时间内可孵出。 取粪便约30g，先经沉淀法浓集，将粪便沉渣倒入三角烧瓶内，加清水至瓶口，在20～30℃的条件下经4～6小时后肉眼或放大镜观察结果。如水面下有白色点状物作直线来往游动，即是毛蚴。必要时也可用吸管将毛蚴吸出镜检。 毛蚴促孵法 将沉淀法处理后的粪便沉渣置于三角瓶内，不加水，或将粪渣置于吸水纸上，再放在20～30℃温箱中过液。检查时，加清水，2小时后就可见到孵出的毛蚴。 肛门拭子检查法 适于肛周产卵（蛲虫），或肛门附近可发现虫卵（带绦虫）的寄生虫虫卵检查法。 棉签拭子法：将湿棉签或角匙在肛门周围擦拭，随后将其放入盛有饱和盐水的试管中充分溶解，然后取液面液体进行镜检，也可离心后取沉渣镜检。 透明胶带法：用长约6cm，宽约2cm的透明胶带粘擦肛门周围皮肤，取下胶带，平贴在玻片上镜检。 试管滤纸培养法 也称钩蚴培养法。根据钩虫卵在适宜条件下可在短时间内孵出幼虫的原理设计的方法。 加水约1ml于洁净试管内，将滤纸剪成与试管等宽但管稍长的T字型纸条。取粪便约0.2～0.4g，均匀地涂抹在纸条竖条的上部2／3处，再将纸条插入试管，下端浸泡在水中，粪便不接触水面。在20～30℃条件下培养3天后肉眼或放大镜检查试管底部。钩蚴在水中作蛇形游动，虫体透明。 虫卵