抗血清的制备实验ppt课件.ppt

溶血反应操作程序(倍比稀释法) 管号 1 2 3 4 5 6 7 8对照 生理盐水 200 200 200 200 200 200 200 200 血清 200 200 200 200 200 200 200 RBC 200 200 200 200 200 200 200 200 终稀释度 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 1/256 -- 弃去 单位：uL 　　观察结果时，应先观察对照管结果是否正确。对照管应不溶血，在对照管结果全部正确前提下观察待测血清管的结果，以出现完全溶血作为抗体的效价。 思考题 溶血反应与补体结合试验有何不同？ 免疫血清的制备 原理：抗原 　抗体 刺激机体 综 合 性　实　验 刺激机体 产生 选择合适的抗原 分离纯化抗原 选择免疫动物 确定免疫方案和程序 免疫动物 采血分离血清 抗血清的纯化与鉴定 抗血清制备的基本流程 设计实验方案的设计 1.设计本实验的理由（实验目的）。 2.实验方案设计。 3. 可行性（理论、人员、实验条件等）。 4.创新性。 5.本实验要解决的主要问题。 6.预期目标。 每个组交一份实验方案（3-4个同学一组） 论文式实验报告 一、题目的选择 1、准确、具体、简洁、醒目，使人一目了然，引起重视 2、作者与单位(班级)，并注明所在班级和指导教师姓名。 3、摘要和关键词 摘要是对论文主要内容和观点的概括 论文式实验报告 二、关键词 又称主题词或索引词，一篇论著(论文)一般选用2～5个关键词 论文式实验报告 三、引言(前言)引言是论文正文的开场白 1、引起读者对本论文的兴趣。 2、为读者提供理解本论文所需的背景资料 。 论文式实验报告 四、材料与方法材料 1、实验对象 2、实验材料 3、实验分组 4、实验过程和方法 6、数据处理等内容。 论文式实验报告 五、结果： 结果是实验研究成果的结晶 论文式实验报告 六、讨论 1.1 1.2 1.3 对实验结果解释和评价 论文式实验报告 七、参考文献 期刊：著者．文章名．刊物名称，卷或年(期)：文章的起讫页码 书籍：编著者．书名．版本．出版地：出版者，年份 一、颗粒性抗原的制备 （2%~5%RBC的制备） （1）静脉采血2-3ml，注入抗凝管中，轻轻混匀。 （2）洗涤RBC 将上述抗凝血移至10ml试管中，加入NS 6-7ml，混匀， 2500r/min离心5min,去上清。重复上述操作三次，最后一次去上清后，将红细胞配制成2%~5%的RBC悬液。 2、取上述RBC悬液1ml免疫家兔。免疫部位：静脉、皮内、皮下等。每只兔子免疫8~10点，每点0.1ml左右。每隔2~4天免疫一次。 1班免疫时间表 每隔2天免疫一次 2班免疫时间表 每隔3天免疫一次 3班免疫时间表 每隔4天免疫一次 3、心脏采血10ml，凝固后，分离血清（2000转/min,5分钟)。 4、取两支小试管并以A、B标记之，将上述血清一半加入A管，另一半加入B管。将A管置于56℃水浴箱30分钟（灭活补体）。 5、抗血清效价的鉴定。 凝集试验和溶血反应 凝 集 反 应 实验原理 　指颗粒性抗原(RBC)与相应抗体特异结合，在适当电解质存在下，形成肉眼可见的凝集现象。 试管凝集试验过程 1.取洁净小试管8支，排列于试管架上，依次编号。 2.向各管中加入生理盐水200ul。 3.向第一支试管中加入A管血清200ul，充分混匀，吸出200ul放入第二管，混匀后取出200ul加入第三管中，如此类推直至第七管，混匀后取出200ul弃去。第八管不加血清，为生理盐水对照管。至此，第1~7管的血清稀释度分别为：1：2，1：4，1：8……1：128。这种稀释方法称为连续倍比稀释法，为免疫试验中常用的稀释方法。 4.向每管加入200ul 2%RBC悬液，此时每管的液体总量为400ul ，血清稀释度又增加1倍。 5.摇匀，置37 ℃ 30min。(取出试管1500r/s 30秒)观察结果。 试管凝集操作程序(倍比稀释法) 管号 1 2 3 4 5 6 7 8对照 生理盐水 200 200 200 200 200 200 200 200 血清 200 200 200 200 200 200 200 RBC 200 200 200 200 200 200 200 200 终稀释度 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 1/256 -- 弃去 单位：uL [结果判断] 选择适当的光暗对比背景，先不要振摇，观察管底凝集物的范围和上清液的浊度。然后轻轻摇动试管，注意观察凝集颗粒的大小、均匀度等。每一试管的观察，都应与对照管进行比较。盐水对照管诮无凝集现象，轻轻摇动试管则RBC分散