实验五厌氧菌和白喉菌课件.ppt

* * 注意: 不要打开培养皿!!! 实验5 厌氧细菌和白喉杆菌 实验目的： 了解厌氧菌的培养方法及其常用培养基介绍. 熟悉常见厌氧菌的形态结构特征和厌氧培养基内生长现象. 熟悉白喉杆菌的形态结构特征. 实验内容： 厌氧培养方法介绍和厌氧培养示教. 常见厌氧菌的形态结构观察. 厌氧培养基上厌氧菌的生长现象观察. Albert染色观察白喉杆菌形态结构. 一、厌氧菌培养方法 厌氧菌所需的气体环境: 无游离氧，5%-10%的CO2 1.化学方法 2.物理学方法 3.生物学方法 1 化学法： 保险粉法: Na2S2O4+2NaHCO3+O2=2CO2+Na2SO4+Na2SO3+H2O 产气袋法：KMB4+H2O→H2+O2→ H2O 焦性没食子酸法： 焦性没食子酸+碱液+O2→焦性没食子橙 钯 2 物理法： 抽气换气法 厌氧手套箱 3 生物法 牛乳基 庖肉基 庖肉培养基: 生成不饱和脂肪酸、还原性谷胱甘肽 肉汤 肉渣 凡士林 牛乳培养基:pH6.8 牛奶(糖 、蛋白……） 石蕊(pH指示剂5,红色;5-8,紫色; 8,蓝色) 凡士林. 保险粉法培养破伤风杆菌。（示教） 2.常见厌氧菌的形态结构观察（示教镜） 破伤风梭菌的芽胞：正圆形、比菌体大，位于菌体末端（特殊染色，x1000） 产气荚膜杆菌粗大的菌体和宽厚荚膜（负染，x1000） 双岐杆菌：G+b，有时有分支生长（G’S，x1000） “汹涌发酵”现象：分解糖产酸产气。产酸使蛋白凝固，产气使凝固蛋白被冲成蜂窝状，凡士林被推向试管口；酸使石蕊呈红色 代谢活跃，产酸且大量产气 产气荚膜梭菌 / 肉汤混浊，肉渣消化，产生气体 破伤风梭菌 石蕊牛奶培养基 庖肉培养基 3.厌氧培养基上厌氧菌的生长现象观察 乳糖 酸+气体 牛乳 酪蛋白 凝固 冲烂 “汹涌发酵”现象的发生机理： 产气荚膜梭菌 * * * 厌氧生物袋是一种特制不透气的塑料袋，袋中装有气体发生管、催化剂小管(内放钯粒)和氧化还原指示剂小管(美蓝)．接种好的平板放入袋中，排出袋中气体，卷叠好袋口，用弹簧夹荚紧，然后折断气体发生小管中安瓿，使发生反应产生CO2、H2等，在催化剂钯的作用下，H2+O2(袋中剩余氧) H2O，这更保证了无氧环境，经0.5h再折断指示剂管中美蓝液安瓿(美蓝在无氧环境中呈无色美白，在有氧环境中又可变成蓝色的美蓝)，如指示剂不变蓝，表示袋内已成无氧环境，此时即可放37℃孵育培养。