犬猫弓形虫病分析_1课件.ppt

犬猫弓形虫病分析 宠医053 谢娇 指导老师 张斌 摘要 本文通过对上海爽佳宠物诊所41例临床病例（主要为犬、猫）进行随机抽取血液样本以提取血清，用层析法-弓形虫IgM试纸条进行免疫检测，通过对检测线的识别来判别检测其为阳性或阴性。分析检测结果来统计家养犬、猫的弓形虫感染情况，结果表面有41%的宠物携带弓形虫，对人畜危害较大。 关键词 弓形虫　　检测　犬 猫 绪论 弓形虫病（toxoplasmosis）又称弓形体病，是由龚地弓形虫引起的人畜共患病。在动物体内多为隐性感染，主要侵犯眼、脑、心、肝、淋巴结等。可引发广泛的临床症状，如弓形虫性脑炎、弓形虫视网膜炎、弓形虫性腹膜炎等。 传统的弓形虫检查方法如镜检、滋养体分离法、卵囊分离法等费时、费力，且其特异性和敏感性不高，常常导致漏诊或错误的诊断；分子生物学诊断技术虽然具有较高的敏感性和特异性，但由于其操作复杂或实验条件要求较高，难以推广应用；免疫学诊断方法是进行弓形虫感染调查、临床弓形虫病筛选诊断的常规方法，具有敏感性高、特异性强、操作简便快速等优点，所以免疫学方法仍是目前弓形虫感染和弓形虫病的主要诊断手段。 1. 材料与方法1.1材料 血清：临床随机抽取犬与猫的血液样本来提取 弓形虫抗体试剂盒：该试剂盒由杭州科彤畜牧兽医研究所、杭州亨力动物医院总经销，试剂盒置2-8℃可保存数月，可常温运输，不可冷冻 10ul微量移液枪、5ML注射器、冰箱 计时器：检测时计算试剂与样本的反应时间 1.2方法 1.2.1准备工作对可疑临床病例进行饲养管理等个方面的详细记录。准备好抽血所要用到的酒精棉球、橡皮带等工具材料。 1.2.2血清样本的制备 先用注射器抽取可疑临床病例的前或后肢静脉血液2～3ML，于试管中，放入离心机中离心2000r/min，10min。离心机分离出血清（无溶血），生理盐水作1比1稀释血清后使用，或置冰箱待用。 1.2.3方法 （1）检测前将待检血清样本从冰箱取出，在室温或37℃恒温箱中平衡10分钟。 （2）将试剂盒置室温静置数分钟。 （3）检测前将检测卡，试剂，样本和对照品平衡至室温（15-30℃）。 （4）检测卡放置于洁净的水平面上。 （5）检测卡上矩形检测窗口底部蓝带下面的样本膜区加10ul样本液。需将样本完全润湿膜区（这会使固定化抗原最大限度保证捕捉到抗体，增强检测的特异灵敏度）。 检测所用到的10ul吸液管使用说明：压挤吸液管上部，然后释放吸液，确保吸液水平线恰在黑色标志处。接触至装置样本区域的膜上，轻轻释放出液体使之全部被加入到膜上。 （6）垂直滴加试剂满3滴（100-120ul/滴）到试剂孔 （7）5-10分钟读取结果。 1.3 结果判定 结果判定标准（请参照上述插图） 阳性：检测线和对照线均出现。（注：低效价的抗体出现的检测线有时会较浅 阴性；只出现检测线。 无效：未出现对照线。此结果出现应使用新的检测装置重新检测 2 结果 统计了上海爽佳宠物诊所2007年1月至2008年3月期间就诊的宠物犬、猫病例41例，从检测结果分析，有41%的犬、猫感染弓形虫，感染率较高，对人和宠物危害较大。 3 分析与讨论3.1病原学 弓形虫属顶端复合物亚门、孢子虫纲、真球虫目，细胞内寄生性原虫。其生活史中出现5种形态，即滋养体（速殖子）；包囊（可长期存活于组织内），呈圆形或椭圆形、直径10～200μm、破裂后可释出缓殖子、裂殖体；配子体和卵囊。前3期为无性生殖，后2期为有性生殖。弓形虫生活史的完成需双宿主：在终宿主（猫与猫科动物）体内，上述5种形成俱存。卵囊随动物粪便排出，在适宜温度（24℃）和湿度环境中，约经2～4天发育成熟，抵抗力强，可存活1年以上，如被中间宿主吞入，则进入小肠后子孢子穿过肠壁，随血液或淋巴循环进入全身各组织细胞内以纵二分裂法进行增殖。 在细胞内可形成多个虫体的集合体，称假包囊，囊内的个体即滋体或速殖子，为急性期病例的常见形态。宿主细胞破裂后，滋养体再侵犯其他组织细胞，如此反复增殖，可致宿主死亡。但更多见的情况是宿主产生免疫力，使原虫繁殖减慢，此外有囊壁形成，称为包囊，囊内原虫称缓殖子。包囊在中间宿主体内可存在数月、数年，甚至终生（隐性感染状态）。 3.2 流行病学 3.2.1感染来源：各种患病及带虫动物都是感染来源，其中急性患病动物的肉、乳、分泌物及排泄物中含有滋养体，慢性动物的肉、眼及脑中含有包囊。猫感染后经3-20天开始排出卵囊，每天排出10-100万，并持续5-14天。 3.2.2 易感动物：人、各种畜禽及多种野生动物均可感染，但以幼龄动物易感性最高。 3.2.3 感染途径：主要经口感染，滋养体型对绵羊和人也可通过胎盘感染。 3.2.4 地理分布及季节动态：该病存在于各地，无明显季节性，但春季和秋季发病较多。 3.3