白血病淋巴瘤免疫分型精要课件.ppt

Keylab of Medicine School of Su Zhou University 白血病的免疫分型 北京爱普益医学检验中心市场部 孙晓琳 流式细胞术的基本概念 流式细胞术（Flow Cytometry, 简称FCM）是一种可以快速、准确、客观，并且同时检测单个微粒（通常是细胞）的多项特性的技术，同时可以对特定群体加以分选 研究对象为生物颗粒，如各种细胞、微生物及人工合成微球等 研究的微粒特性包括多种物理及生物学特征，并加以定量 散射光信号和荧光信号 前向角散射光（FSC, Forward Scatter） 入射激光的前向散射光信号 细胞相对大小及其表面积 侧向角散射光（SSC, Side Scatter） 入射激光90?角的散射光信号 细胞粒度及细胞内相对复杂性 荧光素与特异抗体结合，荧光抗体与细胞抗原结合越多，产生的荧光信号越强。 CD45/SS示意图 抗原分布 表面,胞浆,核内 是共同检测还是分别检测? 血液肿瘤分类进程 白血病免疫分型的理论基础 白血病/淋巴瘤免疫分型采用的抗原标志是表达于正常造血细胞不同分化发育阶段的分化抗原。虽然是恶性肿瘤细胞，但仍能表达正常血细胞所具有的抗原，因而仍可依据其抗原的表达谱对白血病/淋巴瘤进行免疫分型。为了正确分析白血病/淋巴瘤细胞，必须对正常造血细胞分化抗原的表达模式有充分的了解。只有熟悉正常细胞的抗原表达模式，才能辨认白血病/淋巴瘤细胞的存在。 CD45/SS示意图 B淋巴细胞分化与抗原表达关系图 T淋巴细胞分化与抗原表达关系图 粒细胞分化与抗原表达关系图 单核细胞分化与抗原表达关系图 白血病免疫分型 根据白血病细胞表达的系列相关抗原，确定其系列来源。如：淋系T/B、粒单系、红系、巨核系等。 根据白血病细胞表达的系列分化其相关抗原进一步分型。如：早前B，前B，普通B… 初治急白分型 AML-M4 初治急淋分型 多发性骨髓瘤（MM） 多发性骨髓瘤是浆细胞异常增生性疾病。正常浆细胞为CD38+/CD45dim/-，使用 CD38/CD45双标记检测外周血和骨髓标本，可以准确划定浆细胞群。通常使用CD38和CD45，结合轻链检查，对多发性骨髓瘤细胞进行分析。另外，正常浆细胞的表面标记为CD19+/CD56-，而多发性骨髓瘤细胞通常为CD19-/CD56+。CD138目前认为是浆细胞最特异的指标。这样，使用流式细胞仪对外周血或骨髓标本进行多参数分析，并计算异常浆细胞含量，对于多发性骨髓瘤的诊断和治疗评估具有重要意义。 MM 流式免疫表型诊断血液肿瘤的劣势 1、纤维化、硬化的骨髓可能没有足够的细胞分析。 2、细胞太多聚集或成团也可能没有足够的分析细胞。 3、硬化的组织也很难得到足够的分析细胞。 4、组织结构关系、形态关系丢失。 5、比例太低的单克隆B细胞很难检测到。 流式免疫表型诊断血液肿瘤的劣势 6、没有异常免疫表型的T细胞淋巴瘤也可能很难检测。 7、异常的T细胞免疫表型不一定提示T细胞肿瘤，也可能是感染引起的单核细胞增多症、反应性皮肤病、炎症性疾病。 8、取材不好或样品保存不当，可能导致假阴性的结果。 9、HL的肿瘤细胞水平低，所以免疫表型检测或诊断HL不可靠。 10、治疗或复发可能引起肿瘤细胞表面抗原改变。 谢谢! * 表面 胞浆 核内 CD3, CD4, CD8, tetramer cytokines DNA CD3,4,8, tetramer + Cytokines CD3,4,8, tetramer + DNA Cytokines + DNA CD3,4,8, tetramer + Cytokines + DNA 设门 08-03307 设门 全部 细胞 门内细胞 08-03307 细胞类型鉴定 Borowitz et al (1993) AJCP 100:534-40. Steltzer et al (1993) Ann NY Acad Sci 667:265-280 正常骨髓细胞 血液肿瘤细胞 老化粒细胞 、噬酸细胞 早幼—成熟粒细胞 M3、CML 单核细胞 M4、M5 LGL 淋巴细胞 CLL、ALL、CLD 正常