白血病淋巴瘤免疫分型_1课件.ppt

Keylab of Medicine School of Su Zhou University 白血病/淋巴瘤免疫分型苏州大学附属第一医院 江苏省血液研究所卫生部 血栓与止血重点实验室朱明清2010年8 月 杭州 流式细胞术的基本概念 流式细胞术（Flow Cytometry, 简称FCM）是一种可以快速、准确、客观，并且同时检测单个微粒（通常是细胞）的多项特性的技术，同时可以对特定群体加以分选 研究对象为生物颗粒，如各种细胞、微生物及人工合成微球等 研究的微粒特性包括多种物理及生物学特征，并加以定量 散射光信号和荧光信号 前向角散射光（FSC, Forward Scatter） 入射激光的前向散射光信号 细胞相对大小及其表面积 侧向角散射光（SSC, Side Scatter） 入射激光90?角的散射光信号 细胞粒度及细胞内相对复杂性 荧光素与特异抗体结合，荧光抗体与细胞抗原结合越多，产生的荧光信号越强。 CD45/SS示意图 实验对照的设计 空白对照：ALL 阴性对照：常用同型抗体对照 单色分析：设同型抗体对照 多色分析：同型对照，单阳性对照（用于仪器校正） 阳性对照：检测阴性时 抗原表达 需要用多少的标志来确证感兴趣的细胞群? 它们在细胞上的分布是不是很近? 它们是否在不同的细胞上表达不同? 他们表达强还是弱? 抗原分布 表面,胞浆,核内 是共同检测还是分别检测? 血液肿瘤分类进程 目前最完善的血液肿瘤免疫分型文献 白血病免疫分型的理论基础 白血病/淋巴瘤免疫分型采用的抗原标志是表达于正常造血细胞不同分化发育阶段的分化抗原。虽然是恶性肿瘤细胞，但仍能表达正常血细胞所具有的抗原，因而仍可依据其抗原的表达谱对白血病/淋巴瘤进行免疫分型。为了正确分析白血病/淋巴瘤细胞，必须对正常造血细胞分化抗原的表达模式有充分的了解。只有熟悉正常细胞的抗原表达模式，才能辨认白血病/淋巴瘤细胞的存在。 CD45/SS示意图 B淋巴细胞分化与抗原表达关系图 T淋巴细胞分化与抗原表达关系图 粒细胞分化与抗原表达关系图 单核细胞分化与抗原表达关系图 白血病免疫分型 根据白血病细胞表达的系列相关抗原，确定其系列来源。如：淋系T/B、粒单系、红系、巨核系等。 根据白血病细胞表达的系列分化其相关抗原进一步分型。如：早前B，前B，普通B… EGIL，1998年白血病积分系统 分值 B系 T系 髓系 2 CD79a CD3 MPO (cyt)CD22 TCRα/β (cyt)IgM TCRγ/δ 1 CD19 CD2 CD117 CD20 CD5 CD13 CD10 CD8 CD33 CD10 CD65 0.5 TdT TdT CD14 CD24 CD7 CD15 CD1a CD64 *当髓系和一个淋系积分均2分时，则诊断为急性混合细胞型白血病。 急性白血病的四大免疫类型 单表型急性白血病 表达某一个系列抗原为主的急性白血病 双表型/双克隆急性白血病 未分化型急性白血病 初治急白分型 AML-M1 AML-M4 初治急淋分型 B细胞系ALL的免疫分型 亚型 CD19 CD20 HLA-DR CD10 CyIg SmIg FAB分型 早前B-ALL + — + — — — L1,L2 前 B-ALL + —/+ + + + — L1 普通B-ALL + +/ — + + —