武汉大学2016年大学生创新创业训练计划申报书R.ppt

* 课题成员：向仁伸 曾宇阳 高 雷 刘嘉彬 指导老师：陈洪雷 副教授 miR-210调控肺腺癌基质caveolin-1的表达及分析 立项背景 实验设计 综合分析 立项背景 实验设计 综合分析 立项背景 肺腺癌 肺癌：男女性死亡率均居全球癌症首位，发病率位列前三；早期诊断不足，预后差。 肺腺癌：肺原发肿瘤的主要组织学类型，占肺癌比例逐年上升 立项背景之caveolin-1 Cav-1的结构与一般活动 立项背景之肿瘤微环境 肿瘤基质作为“土壤”逐渐成为研究的热点 立项背景之miRNA MicroRNAs是在真核生物中发现的一类内源性的具有调控功能的非编码RNA，通过碱基互补配对的方式识别靶mRNA，并根据互补程度的不同指导沉默复合体降解靶mRNA或者阻遏靶mRNA的翻译； 生物合成途径 立项背景之miRNA miRNA Roadmap Complex and diverse caveolin-1 miR-210 mi-210、Cav-1与CAF 立项依据及设计思路 ？ 肺腺癌 基质Cav-1 miR-210 提出假设：miR-210结合基质Cav-1的mRNA，降低肺腺癌基质Cav-1的表达，促进肺腺癌的侵袭转移 ？ 实验内容 组织实验 验证基质Cav-1在肺腺癌间质中的表达情况； 细胞实验-1 探究CAFs中miR-210与Cav-1之间的表达关系 细胞实验-2 探究CAFs中miR-210调控Cav-1表达对A549侵袭转移的影响 实验内容——组织学实验 基质caveolin-1在肺腺癌中表达降低 正常肺旁组织标本约20例 量子点免疫荧光组织化学法检测基质Cav-1的分布 统计分析 组织芯片的构建 肺腺癌旁组织标本约100例 实验组 对照组 实验组 对照组 实验内容——细胞实验 正常肺成纤维细胞 肺腺癌相关成纤维细胞 肺腺癌A549细胞 anti-miR-210转染 实验组 对照组 实验组 对照组 实验组 量子点偶联靶向 多肽标记后共培养 q-PCR方法检测各组Cav-1的mRNA和miR-210的表达；WB方法检测各组中Cav-1蛋白表达 transwell方法观察各组肺腺癌A549细胞的侵袭性； 实验组 对照组 学生t检验 miR-210降解cav-1 蛋白mRNA的表达，致使基质Cav-1表达降低 实验组A549细胞侵袭性较低 实验总内容 miR-210结合基质Cav-1的mRNA，降低肺腺癌基质Cav-1的表达，促进肺腺癌的侵袭转移 正常肺旁组织标本约20例 量子点免疫荧光组织化学法检测基质Cav-1的含量 统计分析 组织芯片的构建 肺腺癌旁组织标本约100例 实验组 对照组 实验组 正常肺成纤维细胞 肺腺癌相关成纤维细胞 肺腺癌A549细胞 anti-miR-210转染 实验组 对照组 实验组 对照组 实验组 量子点偶联靶向多肽标记后共培养 q-PCR方法检测各组Cav-1蛋白mRNA和miR-210的表达；WB方法检测各组中Cav-1蛋白表达 transwell方法观察各组肺腺癌A549细胞的侵袭性； 实验组 对照组 学生t检验 创新性 本课题首次研究miR-210和基质Cav-1在肺腺癌中的表达关系 本课题首次检测CAFs中miR-210和Cav-1在肺腺癌中的表达水平及关系 本课题首次分析miR-210调节基质Cav-1对肺腺癌侵袭转移的影响 本课题首次进行了肺腺癌CAFs与A549细胞共培养实验 创新性 量子点 靶向多肽 量子点偶联靶向多肽标记不同活细胞 miR-210转染CAFs  可行性分析 理论基础 技术支持 自身条件 前期准备 miR-210在前列腺癌等癌基质细胞出现异常表达，参与调节前列腺癌等的发病、侵袭、转移等 现阶段已阅读了大量相关文献，且已经完成部分试剂订购和材料准备工作，前期相关实验也取得了不错效果 申请人掌握了一定的基础知识和实验技术，学习成绩优异，对科研有着浓厚的兴趣 基础医学院有荧光显微镜、Western blot仪、实时定量PCR仪、凝胶成像系统等实验仪器，完全能满足本课题的需要 *