活性芽孢杆菌的分离、鉴定ppt课件.pptx

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活性芽孢杆菌的分离、鉴定ppt课件

活性芽孢杆菌的分离、鉴定与育种 ;引言;实验目的;实验材料与仪器;实验流程; 一、活性菌株的分离筛选 ; 一、活性菌株的分离筛选 ;二、紫外诱变 ;二、紫外诱变;3.原始菌株及突变株产酶能力的测定及其产酶稳定性检测 (1).标准曲线的制作(见下表) ①取7支20 ml具塞刻度试管,预先洁净灭菌干燥,编号,按表加入试剂。②摇匀,至沸水浴中煮沸5 min。取出后流水冷却,加蒸馏水定容至20 ml,以1号管作为空白调零点,在540 nm的波长下比色测定吸光度值。并建立通过吸光度值求麦芽糖含量的回归方程。;(2)粗酶液淀粉酶活力测定 按以下顺序操作: 取20 ml具塞刻度试管,预先洁净灭菌干燥,编号。取粗酶液1 ml于各只刻度试管中,于60℃水浴中预热5min柠檬酸淀粉缓冲液同时在60℃水中预热5min,→取柠檬酸淀粉缓冲液1ml加入具塞刻度试管中,于60℃水浴中保温30min→加入1.5 ml 3,5-二硝基水杨酸,沸水中5 min,迅速冷却,加蒸馏水定容至20 ml。③定容后,摇匀,用分光光度计测定OD540 nm值。在上述条件下以单位体积样品在30 min释放1 mg麦芽糖所需的酶量为一个麦芽糖单位表示酶活性。 在标准曲线上查出相应的麦芽糖含量按下列公式计算酶活力 酶活力测定公式: 淀粉酶活力=麦芽糖含量(mg)·淀粉酶原液总体积(mL)/所加淀粉质量 后培养:应让变异处理后细胞在液体培养基中培养几小时,使细 胞的遗传物质复制,繁殖几代,以得到纯的变异细胞。;三、高产菌株发酵条件优化 ;三、高产菌株发酵条件优化 ;三、高产菌株发酵条件优化 ;三、高产菌株发酵条件优化 ;三、高产菌株发酵条件优化 ;三、高产菌株发酵条件优化 ;四、活性菌株的鉴定 ;四、活性菌株的鉴定 ;四、活性菌株的鉴定 ;四、活性菌株的鉴定;四、活性菌株的鉴定;五、菌种保藏 ;二、附录 (一)、培养基的配制 1、淀粉培养基 蛋白胨10g,氯化钠5g,牛肉膏5g,可溶性淀粉2g,蒸馏水1000mL,琼脂 15~20g,121℃灭菌20min 2、牛肉膏蛋白胨培养基 蛋白胨10g,氯化钠5g,牛肉膏3g,蒸馏水1000mL,琼脂15~20g,121℃灭菌20min,pH7.0~7.2 3、种子培养基 蛋白胨1%,酵母膏0.5%,NaCl1%,琼脂2%,可溶性淀粉0.25% 4、发酵培养基 玉米粉10g,淀粉15g,豆粉20g,酵母粉3g,KH2PO4 0.3g,ZnSO4 0.2g,MgSO4·7H2O 0.2g,pH7.0 5、糖发酵培养基 蛋白胨水培养基1000mL,1.6%溴甲酚紫乙醇溶液(1.6g溴甲酚紫溶解到100mL乙醇中)1~2mL,pH7.6,另配20%糖溶液,蛋白胨水121℃灭菌20分,20%糖溶液112℃灭菌30 min,分别灭菌后再混合。 6、明胶培养基 牛肉膏蛋白胨液100mL,明胶12~18g,pH7.2~7.4,在水浴锅中将上述成分溶化,不断搅拌溶化后调pH,121摄氏度灭菌30 min; 7、柠檬酸盐培养基 NH4H2PO41g,K2HPO41g,NaCl5g,MgSO40.2g,柠檬酸钠2g,琼脂15~20g,蒸馏水1000mL,1%溴香草酚蓝乙醇液10mL,将上述各成分加热溶解后,调pH6.8,然后加入指示剂,摇匀,用脱脂棉过滤。制成后为黄绿色,分装试管,121摄氏度灭菌20 min后制成斜面。 8、醋酸铅培养基 pH7.4的牛肉膏蛋白胨琼脂100mL,硫代硫酸钠0.25g,10%醋酸铅水溶液1mL,将牛肉膏蛋白胨琼脂培养基加热溶解,待冷却至60摄氏度加入硫代硫酸钠调pH7.2分装于三角瓶中,115摄氏度灭菌15 min。取出后待冷至55~60摄氏度,加入醋酸铅水溶液,混匀后倒入灭菌试管中。 9、吲哚培养基 蛋白胨10g,NaCl5g,蒸馏水1000mL,pH7.6,121摄氏度灭菌20 min 10、葡萄糖蛋白胨培养基(V.P.、M.R实验) 蛋白胨5g,葡萄糖5g,K2HPO4 2g,蒸馏水1000mL,将上述各成分溶于水中,调pH7.0~7.2,分装试管,112摄氏度灭菌30 min。 11、硝酸盐液体培养基 MgSO40.05%,K2HPO40.05%,KNO30.1%,蔗糖2%,NaCl0.05%,Ph7.2,115摄氏度高压蒸汽灭菌30 min。 ;12、酪素培养基 A液:Na2HPO4·7H2O 1.07g,干酪素4g,加适量蒸馏水,并加热溶解 B液:KH2PO4 0.36g,加水溶解 A、B液混合后,加入酪素水解液0.3mL,加琼脂20g最后用蒸馏水定容至1000mL。 酪素水解液的配制:1g酪蛋白溶于碱性缓冲液中,加入1%的枯草芽孢杆菌蛋白酶25mL加水至100mL,30摄氏度水解1h。用于配制培养基时其用量

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