一个少见δβ地中海贫血大片段缺失突变家系分析.docVIP

一个少见δβ地中海贫血大片段缺失突变家系分析 　　摘要：目的 对1例少见的β珠蛋白基因簇大片段缺失突变引起的中国型δβ地中海贫血合并异常血红蛋白E患者及其家系进行分析。 方法 全自动血细胞分析仪检测红细胞指数和全自动毛细管电泳分析血红蛋白（Hb）；反向点杂交（RDB）技术用于检测中国人常见17种β地中海贫血点突变；应用gap-PCR方法分析少见的β珠蛋白基因簇大片段缺失突变。结果 检测到患者及其女儿均为一种少见的β珠蛋白基因簇大片段缺失中国型Gγ+（Aγδβ）0突变携带者，患者最终诊断基因型为中国型Gγ+（Aγδβ）0/βE，其女基因型为Gγ+（Aγδβ）0/βN。结论 地中海贫血基因检测时，除了进行常规类型检测以外，也要关注是否有少见或罕见地中海贫血突变类型的存在。 　　关键词：β地中海贫血；δβ地中海贫血；血红蛋白E 　　地中海贫血是全球广为流行的遗传性溶血性疾病，是最常见的单基因遗传病之一[1]，是由于α或者β珠蛋白肽链合成缺陷而引起。因为α或β珠蛋白基因变异而导致的Hb结构异常称为异常血红蛋白，如异常Hb E和异常Hb Q在中国南方发病率较高[2]，Hb E也同时被归类为β地中海贫血的一种。 　　地贫的分子病理具有高度的异质性。每个种族人群有其自身的常见突变类型，在β地中海贫血的高发地区，除常见β珠蛋白基因点突变以外，也存在β珠蛋白基因簇的大片段缺失的突变类型，包括δβ地中海贫血和遗传性持续性胎儿血红蛋白增高症（hereditary persistence of fetal hemoglobin，HPFH）[3]。本研究对1例δβ地中海贫血合并异常Hb E的地中海贫血患者及其家系进行研究分析。 　　1病例与方法 　　1.1 病例：来本院进行地中海贫血基因诊断的母女二人，母亲28岁，女儿2岁。 　　1.2 方法 　　1.2.1 血液学表型分析：应用德国Siemens全自动血细胞分析仪ADVIA2120检测红细胞指数；血红蛋白分析采用法国Sebia 全自动电泳仪capillary 2检测。 　　1.2.2 DNA样本制备：抽取家系中2人的外周静脉血，应用厦门致善生物公司生产的磁珠法基因组DNA提取试剂盒和自动化仪器（Lab-Aid 820）提取基因组DNA。 　　1.2.3 基因突变分析：① 应用深圳亚能生物技术公司PCR-RDB试剂盒，按说明书扩增待测DNA样品β珠???白基因特异DNA序列，将扩增产物与17种中国人常见β地中海贫血基因突变的寡核苷酸探针进行RDB杂交，明确基因突变类型；② 采用双重Gap-PCR体系检测两种断裂点明确的β珠蛋白基因簇大片段缺失突变，每个检测体系均包括扩增缺失截短目的片段和正常内对照的片段的PCR反应。引物序列如下：中国型Gγ+（Aγδβ）0缺失共用上游引物（DBT-F）：CCA GCC TCA TGG TAG CAG AATC；中国型Gγ+（Aγδβ）0缺失突变下游引物（DBT-RM）：TGG TAT CTG CAG CAG TTG CC； 中国型Gγ+（Aγδβ）0缺失正常内对照下游引物（DBT-RW）：GTG ATT GTT GAG TTG CAA GAT CG；SEA-HPFH缺失突变上游引物（HPFH-FM）：CCA GAA ATT GCC TCA TGT CTC T；SEA-HPFH缺失正常内对照上游引物（HPFH-FW）：GC AGG TAG TTG TTC CCC TTC A；SEA-HPFH缺失共用下游引物（HPFH-R）：GCT GGA CAC ATA TAA AAT GCT GC。 　　2结果 　　2.1血液学分析结果：该家系中母亲红细胞指数MCV为63.3fL，MCH为21.6pg；女儿红细胞指数MCV为80.4fL，MCH为26.0pg，均具备小细胞低色素特征。血红蛋白分析结果发现母亲的Hb A2占4.2%，同时发现异常Hb F占34.0%以及Hb E占61.8%，提示可能为β地中海贫血携带者。其女儿血红蛋白结果未见异常。 　　2.2基因突变分析结果：RDB结果显示为βE突变位点纯合子，女儿结果未见异常。母女双方结果均检测到δβ阳性条带及正常条带，为中国型Gγ+（Aγδβ）0缺失杂合子。母亲基因型为中国型Gγ+（Aγδβ）0/βE，其女基因型为中国型Gγ+（Aγδβ）0/βN。 　　3讨论 　　δβ地中海贫血和HPFH的共同特征是基因发育阶段特异性表达失控而导致出生后胎儿血红蛋白HbF持续增高， 多数同时伴有不同程度的A2和非A2肽链比例失衡。HPFH一般较δβ地中海贫血有更高水平的Hb F， 但少有贫血的表现， 红细胞形态一般正常； 而δβ地中海贫血则更多趋向于类似β地中海贫血的小细胞低色素贫血（MCH和MCV值低于正常）的表型[