理化因素对微生物的影响;细菌的生长现象与生化反应 ppt课件.ppt

【方法】 ①取琼脂平板培养基二块，于其底部玻璃上用标签纸注明本人所接种的菌株名称（或将平板底部以蜡笔划为六等分，分别在靠近边缘处注明青、链、氯、庆大等字样）。 ②以灭菌接种环挑取菌液，在培养基表面作密集划线接种。 ③将镊子火焰灭菌，待冷后再取各药物纸片，分别牢贴于种有细菌的平板培养基表面相应位置，每次贴片后镊子均应经火焰烧灼灭菌。每张纸片间距不少于24mm，纸片中心距平皿边缘不少于15mm，并分别作好标记。 在直径90mm的平板上均匀摆放药敏纸片的样板 ④37℃孵育18～24h后，分别测量各纸片抑菌环直径(包括纸片在内)(mm)，抑菌环的边缘以肉眼见不到细菌明显生长为限。判定其敏感度。 【材料】 ①金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、琼脂平板培养基。 ②抗生素纸片(青、链、氯、庆大霉素、磺胺等)、尖头镊子、酒精灯、接种环。 【方法】 ①取琼脂平板培养基二块，于其底部玻璃上用标签纸注明本人所接种的菌株名称（或将平板底部以蜡笔划为六等分，分别在靠近边缘处注明青、链、氯、庆大等字样。 操作： 1） 抗生素敏感试验（普通平板 2块/3人） 2）抗生素纸片(青霉素、链霉素、庆大霉素、黄连素 1套/6人) 3）大肠杆菌、敏感金葡菌培养物（1支/6人） 药物敏感试验结果判断参考标准： 抗菌药物 抑 菌 圈 直 径 （mm） 耐药 中度敏感 敏感 青霉素 ＜10 10～12 ≥13 链霉素 ＜10 10～14 ≥15 其它抗生素 ＜10 10～15 ≥16 敏感：表示常规剂量的药物在体内所达到的浓度能抑制或杀灭待测菌；中度敏感：指提高测定药物的剂量或在该药物浓集部位，细菌生长可被抑制；耐药：表示常规剂量的药物在体内所达到的浓度不能抑制或杀灭待测菌。 【结果观察记录】填表药物敏感试验(纸片扩散法)结果 抗生素 大肠埃希菌 金黄色葡萄球菌 抑菌圈直径(cm) 敏感度 抑菌圈直径(cm) 青霉素 红霉素 庆大霉素 先锋霉素 氯霉素 思考题 药敏实验的意义是什么？ 实验四 理化因素对微生物的影响；细菌的生长现象与生化反应 基础部微生物学教研室 [教学目标] 1.了解细菌代谢产物的生化检查方法。 2.熟悉常见的物理化学因素对细菌生长的影响。 3.熟悉细菌对抗生素的敏感试验方法与步骤。 4.掌握细菌在不同培养基中的生长现象。 教学重点与难点： 重点：细菌在不同培养基中的生长现象。 难点：药敏试验的判断，细菌常见的代谢产物并分析其生化反应现象的意义 【材料】  血液琼脂平板培养基、灭菌棉拭、接种环、酒精灯。紫外线灯、 2.5％碘酒、75％乙醇、1％龙胆紫、2％红汞、1:1000新洁尔灭、无菌滤纸片、葡萄球菌培养液、大肠埃希菌培养液、琼脂平板、无齿小镊子。 抗生素纸片(青、链、氯、庆大霉素、磺胺等)。 教学基本内容： 一、观看录像：消毒灭菌 二、 讲解紫外线杀菌的原理，抗生素敏感实验的原理与操作 三、操作讲解与示范：观察细菌在不同培养基中的生长现象。 检查细菌常见的代谢产物并分析其生化反应现象的意义。 四、学生动手操作 一、观看录像：消毒灭菌 二、消毒灭菌试验 讲解紫外线杀菌的原理； 抗生素敏感实验的原理与操作 消毒与灭菌方法 加热灭菌 干热灭菌 湿热灭菌 过滤除菌 辐射灭菌 放射线辐照灭菌 紫外线灭菌 化学药品灭菌 干热灭菌 干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。 细胞内的蛋白质凝固性与其本身的含水量有关，在菌体受热时，当环境和细胞内含水量越大，则蛋白蛋凝固就越快，反之含水量越少，凝固缓慢。 因此，与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温度要高（160～170℃），时间要长（1～2h），但干热灭菌温度不能超过180℃，否则，包器皿的纸或棉塞就会烧焦，甚至引起燃烧。 微孔滤膜过滤除菌 过滤除菌是通过机械作用滤去液体或气体中细菌的方法。根据不同的需要选用不同的滤器和滤板材料。微孔滤膜过滤器是由上下二个分别具有出口和入口连接装置的塑料盖盒组成，出口处可连接针头，人口处可连接针筒，使用时将滤膜装入两塑料盖盒之间，旋紧盖盒，当溶液从针筒注入滤器时，此滤器将各种微生物阻留在微孔滤膜上面，从而达到除菌的目的。根据待除菌溶液量的多少，可选用不同大小的滤器。此法除菌的最大优点是可以不破坏溶液中各种物质的化学成分，但由于滤量有限，所以一般只适用于实验室中小量溶液的过滤除菌。 （一）煮沸与高压灭菌法 【原理】 高温对细菌有明显的致死作用，主要机制是凝固菌体蛋白质，也可能与细菌DNA单螺旋断裂、细菌细胞膜