生物化学-第四章酶PPT课件.ppt

三.米氏方程的推导 根据中间产物学说，酶促反应分两步进行: Km值表示酶与底物之间的亲和程度：Km值大表示亲和程度小， 酶的催化活性低; Km值小表示亲和程度大,酶的催化活性高。 四.米氏常数Km的意义 1.米氏常数的含义 由米氏方程可知，当反应速度等于最大反应速度一半时,即V = 1/2 Vmax, Km = [S] 上式表示,米氏常数是反应速度为最大值的一半时的底物浓度。因此,米氏常数的单位为mol/L。 2.酶的特征物理常数 不同的酶具有不同Km值，它是酶的一个重要的特征物理常数。Km值只是在固定的底物，一定的温度和pH条件下，一定的缓冲体系中测定的，不同条件下具有不同的Km值。 3.表示酶与底物之间的亲和程度 4.判断酶的最适底物 Km最小的底物 5.计算一定速度下的底物浓度 V= 80% Vmax 时， (S)=？ 由： 0.8 Km + 0.2 (S)= (S), 0.8 Km = 0.2 (S) (S)=4 Km 又: V= 99% Vmax , (S)= 99 Km 6.了解酶的底物在体内的浓度水平 Km ≈ (S) 7.判断反应的方向 Km最小的反应 8.判断抑制作用的类型 1.双倒数作图法 1 Km 1 1 ??? = ?? ? ??? + ?? V Vmax [S] Vmax 取米氏方程式的倒数形式： 五.米氏常数Km的测定 测定Km和V的方法很多，最常用的是Lineweaver–Burk的作图法 — 双倒数作图法。 1/Vmax 斜率=Km/Vmax -1/Km V/(S) Vmax V Vmax/Km 斜率=-Km 2.Eadie-Hofstee方程 由： 方程两边乘以 Km +（S）/（S） V(Km+（S）/ （S）) V=- Km(V/ （S）)+Vmax V V/(S) 作图 最适温度 第七节 影响酶促反应速度的因素 一.温度对酶反应的影响 一方面是温度升高,酶促反应速度加快。 另一方面,温度升高,酶的高级结构将发生变化或变性，导致酶活性降低甚至丧失。 因此大多数酶都有一个最适温度。 在最适温度条件下,反应速度最大。 二.pH对酶反应的影响 在一定的pH下, 酶具有最大的催化活性,通常称此pH为最适pH。 速度 酶浓度 三.酶浓度对酶反应的影响 在底物足够过量而其它条件固定的情况下，并且反应系统中不含有抑制酶活性的物质及其他不利于酶发挥作用的因素时，酶促反应的速度和酶浓度成正比 四.激活剂对酶反应的影响 1.概念：凡是能提高酶活力的物质(简单化合物)都称为酶的激活剂。 （activator)。 2.成分：其中大部分是一些无机离子和小分子简单有机物。 如：Na+、K+、Ca2+、Mg2+、Cu2+、Zn2+、Co2+、Cr2+、Fe2+、 Cl-、Br-、I-、CN-、NO3-、PO4- 、GSH 、VitC 等； 3.功能：1）.这些离子可与酶分子上的氨基酸侧链基团结合， 可能是酶活性部位的组成部分， 2）.也可能作为辅酶或辅基的一个组成部分起作用； 4.特点：1）.一般情况下，一种激活剂对某种酶是激活剂，而对另 一种酶则不一定是激活剂，可能发生抑制作用； 2）.对于同一种酶，不同激活剂浓度会产生不同的作用。 五.抑制剂对酶反应的影响 （一）.酶的抑制作用的概念 有些物质能与酶分子上某些必须基团结合（作用),使酶的活性中心的化学性质发生改变，导致酶活力下降或丧失，这种现象称为酶的抑制作用。 抑制剂： 能够引起酶的抑制作用的化合物则称为抑制剂 （inhibitor)。　 抑制作用的特点：酶的抑制剂一般具备两个方面的特点： a.在化学结构上与被抑制的底物分子或底物的过渡状态相似。 b.能够与酶的活性中心以非共价或共价的方式形成比较稳定的复合体或结合物。 （二）.抑制作用的类型 1.不可逆抑制作用 抑制剂与酶反应中心的活性基团以共价形式结合，引起酶的永久性失活。如有机磷毒剂二异丙基氟磷酸酯。 2.可逆抑制作用： 抑制剂与酶蛋白以非共价方式结合，引起酶活性暂时性丧失。抑剂 可以通过透析等方法被除去，并且能部分或全部恢复酶的活性 根椐抑制剂与酶结合的情况，又可以分为三类： （1）竞争性抑制： 概念：某些抑制剂的化学结构与底物相似，因而能与底物竟争 与酶活性中心结合。当抑制剂与活性中心结合后，底物被排斥 在反应中心之外，其结果是