细胞色素C的制备及测定课件.ppt

细胞色素C的制备及测定 一、基本原理 细胞色素C的基本简介 蛋白质及多肽类药物分离纯化 的基本原则及注意事项 1. 细胞色素C的基本简介 生物氧化过程中重要的电子传递体。 主要存在于线粒体中，需氧多的组织含细胞色素C最多，如心肌及酵母细胞的细胞色素C含量比一般组织细胞的高。 氨基酸中含有较多的精氨酸，故呈碱性，等电点pI为10.2～10.8 它可分为氧化型和还原型两种，两者在水溶液中的颜色明显不同：其氧化型水溶液呈深红色，还原型水溶液呈桃红色。其中还原型较氧化型稳定。 临床作用 细胞色素C是一种细胞呼吸激活剂。在临床上细胞呼吸障碍引起的一系列缺氧状态，在使用细胞色素C后就可以纠正其物质的代谢，使细胞恢复正常呼吸，病情得到缓解或痊愈。细胞色素C目前在临床上虽非特效药物，但可用于缺氧急救、解毒及其辅助治疗，是治疗组织缺氧及由缺氧所引起的一系列症状的重要生物药品。 1.原料的选择和预处理 2.原料的粉碎； 3.提取，即从原料中经溶剂分离有效成分，制成粗品的工艺过程； 4.纯化，即粗制品经盐析、有机溶剂沉淀、吸附、层析、透析、超离心、膜分离、结晶等步骤进行精制的工艺过程； 6.成品及.制剂，即半成品或原料药经精细加工制成片剂、口服液、针剂、冻干剂等供饮用或临床应用的各种剂型。 5.干燥及保存； 2. 蛋白质及多肽类药物分离纯化 二、实验基本过程 细胞色素C的制备 细胞色素C的含量测定 细胞色素C的制备 取新鲜或冰冻猪心 ? 除去脂肪和韧带 ? 用水洗去积血 ? 切成小块 ? 放入绞肉机绞碎 1. 材料处理 每组称量碎肉 x g，加自来水2x mL ，搅拌 ? 用2mol/L H2SO4调pH～ 4.0（需不断调整） ? 搅拌提取2h ? 用1mol/L NH4OH调pH6.0 ? 用四层纱布挤压过滤，收集滤液， 肉渣回收 ?? 2. 提取 自来水1.5x mL; 搅拌提取1h 3. 中和 合并滤液 ? 用1mol/L NH4OH调pH 7.2 ? 静置～30min，使溶液分层 ? 过滤除杂质 4. 吸附和洗脱 每组称人造沸石11g 合并清液 ? 浮选 平均分成两份 自来水装柱 ? 上样（1 ml/min） ? Cyt.C吸附 ? 取出浮石，放入烧杯中，依次用自来水、去离子水、 0.2% NaCl、去离子水清洗 ? 装柱后用25% (NH4)2SO4洗脱（流速小于2mL/min） 5. 盐析 收集红色洗脱液，量体积（控制在10mL左右） ? 每100mL洗脱液加20 g固体(NH4)2SO4，边加边搅拌至(NH4)2SO4完全溶解，并有沉淀析出 ? 室温静置30 min ?