核酸荧光染色技术在血液分析仪课件.ppt

核酸荧光染色技术在血液分析仪的必威体育精装版应用 技术： 电阻抗、光散射、高频波、化学染色、及流式细胞术。 目的： 精确定量检测白细胞的五种亚型。 半导体激光提供的细胞信息 前向散射光(FSC)：反映细胞大小。 侧向散射光(SSC)：反映细胞的内容物如核和颗粒。 侧向荧光(SFL)：反映细胞内DNA、RNA的含量。 3.高端机的作用 普通机对异常标本报警的灵敏度有限，常漏报。 为了提高灵敏度，降低报警阈值，导致假阳性率升高。 致力于高灵敏度地检测粒细胞的幼稚、异常成分。 2.红细胞、血小板系统 检测网织红细胞和有核红细胞，并能对网织红细胞的成熟度进一步分类。 对于存在巨大血小板、血小板聚集、小红细胞或细胞碎片的样本，采用核酸染色加光学流式原理能准确检测血小板。 二.核酸荧光染色加流式白细胞分类原理及临床应用 细胞浆的组成 核糖体：RNA占60%，PRO占40% 线粒体 内质网 高尔基体与中心粒 微管 微丝 溶酶体 细胞核的组成 核膜：胞浆中内质网的延伸。核孔是核浆与胞浆交流及RNA进入胞浆的通道。 核染色质：由DNA、组蛋白、非组蛋白组成。 核仁：核仁丝与颗粒成分含RNA,核仁染色质含DNA。 核浆：是细胞核体积随细胞成熟而变小的原因。 细胞发育成熟的变化 细胞越幼稚，细胞核越大。 细胞越幼稚，核染色质越疏松细致，核仁越明显。 越幼稚细胞浆越少，瑞氏染色着色越深，表明浆内RNA含量越高。 1.DIFF 检测通道 检测参数 Lymphocytes Monocytes Eosinophils Neutrophils,+ Basophils other 正常DIFF与BASO散点图 有核细胞在4DIFF散点图上的分布 4DIFF散点图 2. WBC/Baso 检测通道 检测参数 WBC Basophil 成人T细胞白血病（ATL）： 与人类T淋巴细胞病毒Ⅰ型(HTLV- Ⅰ)相关的疾病。 CD4+的细胞是HTLV- Ⅰ 和HTLV- Ⅲ 主要侵袭的细胞，是此类病毒的受体。 其免疫表型： T细胞成熟标志： CD4+ CD3+ CD2+ CD6+ T细胞活化标志： CD25(IL－2受体α链)+ 外周血中可出现多形淋巴细胞:淋巴细胞大小不等，核染色质中等致密，核仁模糊不清，核明显不规则，呈多形性改变，扭曲、畸形或呈分叶状，核凹陷很深，呈二叶或多叶，或呈棒球状、手套状或折叠为花瓣状，故也称花细胞。 形成原因：机体在某些因素的作用下，细胞的增殖紊乱，失去控制，由二极有丝分裂转变为三极或多极分裂；可有不对称的核分裂，分裂后形态奇异。 大颗粒型淋巴细胞白血病(LGLL) 正常人血象中的颗粒型淋巴细胞属大淋巴细胞，大部分为NK细胞，部分为T细胞。 LGLL：T-LGLL与NK-LGLL 颗粒性原幼淋巴细胞胞浆在瑞氏染色中常染成蓝色，胞浆中出现5－15粒清晰的粗大的颗粒。 诊断标准：骨髓中颗粒性原幼淋巴细胞应: ＞5% ，一般＞10% 。 N-T-ALL N-T-ALL通常为B淋巴细胞系统白血病，极少为起源于淋巴干细胞或性质不明。 分型： Ⅰ型：无标志型 Ⅱ型：普通型 Ⅲ型：前B细胞型 Ⅳ 型：B细胞型 主要表型标志：HLA-DR、CD19、CD20、CD10的表达不同。 B-ALL CML急变 AML-M2 M5b 三.核酸荧光染色检测网织红细胞参数原理及临床应用 RET 检测通道检测参数 RET IRF LFR MFR HFR PLT-O IRF是评价肿瘤化疗后骨髓造血功能受抑和开始恢复的较敏感的指标。 较RET#达到正常参考范围低限要早14天。 Mugurama应用R-1000对27例白血病和淋巴瘤病人，在化疗期间作了网红各参数的系统观察。 发现有14例在化疗开始时，HFR+MFR的降低早于中性粒细胞和血小板。 有37.2%的病例HFR+MFR与其它参数同时降低。 在骨髓恢复时，52.8%的病例HFR或MFR迅速升高，HFR+MFR与WBC、PLT同时升高的仅占25%。 Kageoka等利用Sysmes R-1000分析了骨髓和外周血中网红与造血状态的关系，发现外周血网红计数用于分析骨髓造血状态优于白细胞计数和血小板计数，化疗后骨髓造血功能从抑制到恢复时，末梢血中HFR的增高较WBC的增加早数天。 外周血造血干细胞移植后病人的IRF%升高提示有较多未成熟细胞从骨髓进入外周血，表明该病人骨髓的造血功能已开始恢复。 从我们观察的病例可以看出，移植后IRF在一定时间内可以出现并升高，则病人死亡率为零。 因此我们认为IRF的变化较网织红细胞总数变化具有更重要意义，IRF%的变化可作为评价肿瘤病人化疗或外周血干细胞移植过程中骨髓造血功能受抑和开始恢复的较敏感指标。 四.核酸荧