猪瘟抗体检测PPT课件.ppt

猪瘟抗体ELISA检测;提 纲;一、ELISA概念及类型; ELISA的原理 ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。;在ELISA方法中有三个必要的试剂： （1）固相的抗原或抗体，即“免疫吸附剂”（immunosorbent）； （2）酶标记的抗原或抗体，称为“结合物”（conjugate）； （3）酶反应的底物。 ;几种常用的ELISA检测方法;洗涤液配置：浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水25倍稀释。 用CSFV样品稀释液20倍稀释待检样品 使用前所有试剂盒组分应恢复到18-26℃，并震荡混匀。;四、猪瘟ELISA操作过程;2、洗板，弃去各空液体，280vl/孔已稀释洗涤液洗涤板空，共洗5次，每次洗涤后弃孔内液，最后一次将板空洗涤液拍干。 3、加酶结合物，每孔100vl，封板37℃温育30min。 ;4、重复步骤2洗板。 5、每孔加入50vl显色A液和50vl显色B液（也可A、B显色液等比例混合后加入100vl），封板37℃温育10min。 ;6、每孔加入50vl终止液，终止反应。 7、测量并记录样品和对照的OD值（450nm）;结果分析;五、注意事项;1、基本操作注意事项 ;1、基本操作注意事项 ;1、基本操作注意事项 ;1、基本操作注意事项 ;2、ELISA操作要点 ;