细菌的革兰氏染色和形态观察ppt课件.ppt

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细菌的革兰氏染色和形态观察ppt课件

实验一 细菌的革兰氏染色和形态观察 球菌 杆菌 弧菌 实验一 细菌的革兰氏染色和形态观察 一、实验目的 1、掌握无菌操作技术和细菌抹片的制备方法 2、学习掌握单染色的操作技术 3、了解革兰氏染色机理,并掌握其操作技术 4、 熟悉显微镜的使用、学习并掌握油镜的原理和使用方法 二、实验原理---简单染色 细菌的细胞小而透明,在普通的光学显微镜下不易识别,必须对它们进行染色。利用单一染料对细菌进行染色,使经染色后的菌体与背景形成明显的色差,从而能更清楚地观察到其形态和结构。此法操作简便,适用于菌体一般形状和细菌排列的观察。 常用碱性染料进行简单染色,这是因为在中性、碱性或弱酸性溶液中,细菌细胞通常带负电荷,而碱性染料在电离时,其分子的染色部分带正电荷,因此碱性染料的染色部分很容易与细菌结合使细菌着色。经染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的对比,在显微镜下更易于识别。常用作简单染色的染料有美蓝、结晶紫、碱性复红等。当细菌分解糖类产酸使培养基pH下降时,细菌所带正电荷增加,此时可用伊红、酸性复红或刚果红等酸性染料染色。 二、实验原理---简单染色 染色前必须固定细菌。其目的有二:一是杀死细菌并使菌体粘附于玻片上;二是增加其对染料的亲和力。常用的有加热和化学固定两种方法。固定时尽量维持细胞原有的形。 二、实验原理---革兰氏染色 革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家ChristainGram氏创立的,革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌(G+)和革兰氏阴性菌(G-)两大类。革兰氏染色法是细菌学中最重要的鉴别染色法。 革兰氏染色法所以能将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性,是由这两类细菌细胞壁的结构和组成不同决定的。 二、实验原理---革兰氏染色 革兰氏染色法的基本步骤是:先用初染剂结晶紫进行初染,再用碘液媒染,然后用乙醇(或丙酮)脱色,最后用复染剂(如番红)复染。经此方法染色后,细胞保留初染剂蓝紫色的细菌为革兰氏阳性菌;如果细胞中初染剂被脱色剂洗脱而使细菌染上复染剂的颜色(红色),该菌属于革兰氏阴性菌。 二、实验原理---革兰氏染色 当用结晶紫初染后,像简单染色法一样,所有细菌都被染成初染剂的蓝紫色。碘作为媒染剂,它能与结晶紫结合成结晶紫一碘的复合物,从而增强了染料与细菌的结合力。当用脱色剂处理时,两类细菌的脱色效果是不同的。革兰氏阳性细菌的细胞壁主要由肽聚糖形成的网状结构组成,壁厚、类脂质含量低,用乙醇(或丙酮)脱色时细胞壁脱水、使肽聚糖层的网状结构孔径缩小,透性降低,从而使结晶紫-碘的复合物不易被洗脱而保留在细胞内,经脱色和复染后仍保留初染剂的蓝紫色。革兰氏阴性菌则不同,由于其细胞壁肽聚糖层较薄、类脂含量高,所以当脱色处理时,类脂质被乙醇(或丙酮)溶解,细胞壁透性增大,使结晶紫-碘的复合物比较容易被洗脱出来,用复染剂复染后,细胞被染上复染剂的红色。。 三、实验器材 1、菌种:金黄色葡萄球菌、大肠杆菌斜面菌种。 2、显微镜、载玻片、擦镜纸、酒精灯、接种环、吸水纸、盖玻片、试管、水浴锅。 3、草酸铵结晶紫染色液、卢戈氏碘液、95%乙醇、0.5%番红色液、蒸馏水、双层瓶(香柏油和二甲苯)。 四、实验方法和步骤 细菌的简单染色 1、涂片:用1%盐酸清洁玻片后,在玻片中央滴上一小滴蒸馏水,再用无菌操作的方法挑菌少许于玻片的水中,并充分混匀涂成薄膜。 2、干燥:将涂片置火焰高处微热烘干或自然干燥。 3、固定:涂面朝上,通过微火2-3次。 4、染色:待玻片泠却后加结晶紫1-2滴于涂片上,覆盖涂面染色1-2分钟。 5、水洗:倾去染色液,用水自玻片一端轻轻冲洗至流下的水变无色为止(注:勿冲去菌体)。 6、干燥:自然干燥,或用吸水纸吸干。 7、镜检:油镜观察并绘图。 四、实验步骤 1、菌落形态观察: 2、细菌简单染色: 3、细菌革兰氏染色。 注意:菌落颜色、湿度、形状、大小、透明度、颜色、边缘是否规则等特征。 染色过程: 涂片→干燥→固定→染色(1min)→水洗→干燥→镜检 注意事项: 涂片:取菌量不能太大 干燥:自然干燥 水洗:水流不能直接冲在涂菌处 滴加少量水 挑取菌体 涂片 干燥 固定 染色 水洗 干燥 2. 革兰氏染色 1)、涂片:取清洁玻片一块,在玻片两端1/4处下面用记号笔分别标明S和E(见图示),并滴一滴蒸馏水,分别将金黄色葡萄球菌和大肠杆菌涂布在相应的区域内。 2. 革兰氏染色 2、干燥与固定:方法同(一)中2,3步骤 3、染色: 结晶紫染色1-2分钟--水洗--碘液媒染1-2分钟--水洗--酒精脱色15-20秒--水洗--番红复染色2-3分钟--水洗--干燥--镜检记录。 染色结果 金黄色葡萄球菌革兰氏染色结果 染色结果 大肠杆

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