考研必备要点生物化学氨基酸ppt课件.ppt

苯环的黄色反应 phe+少量浓H2SO4+浓HNO3 黄色 Tyr or Trp + 浓HNO3 黄色 Folin一酚反应 + 磷钼酸 Tyr 磷钨酸 or Trp 蓝色（钼蓝与钨蓝混合物） 乙醛酸反应 （紫色环反应） 吲哚 Trp+浓H2SO4-----紫色环 六、氨基酸混合物的分析分离 ——利用AA成分分配系数的差异 （一）分配层析法的一般原理 ? 分配层析原理 　　层析系统有两个相组成，一个是固定相，一个是流动相，混合物在层析系统中的分离决定于该混合物的组分在这两相分配系数。 分配定律：一种溶质在两种一定的互不相溶的溶剂中分配，在一定温度下达到平衡后，溶质在两相中浓度比值为一常数，即分配系数。 { 层析系统 固定相 { 流动相 附着在固相上的液体 固体 按两相所处状态分： 流动相 液体 气体 固定相 液体 液液层析 气液层析 固体 液固层析 气固层析 先决条件： 分配系数有差异， 差异越大，越容易分开。 柱 固定相装于柱内 纸 固定相是液体，吸附在滤纸上，将样品点在纸上，用流动相展开 薄层 将有适当粘度的固定相涂在薄板上 薄膜 与纸层析相似， 纸用其它高分子有机吸附剂代替 按操作形式分： 吸附 固体 吸附能力不同 分配 液体 分配系数不同 离子交换 离子交换剂 亲和性不同 凝胶 多孔凝胶， 通过速度不同 亲和 固定相只能与一种组分结合， ——分开其它无亲和力的组分 按层析原理分： 固定相 各组分对固定相 (1) 纸层析 ★ 支持剂：滤纸 固定相：吸附水 流动相：丁醇、醋酸、水 ★ 原理： 混合氨基酸在这两相中不断 的分配，使他们分布在滤纸 的不同位置。 ★基本步骤：点样、展层、现色、定性（定量） （2）纸层析 单向纸层析图 Rf值 双向纸层析图 相对迁移率 Rf = X/Y　 X-原点到层析点 的距离 Y-原点到溶剂前 沿距离 (2) 柱层析 填充物：填充物为亲水性的不溶物 质纤维素、淀粉、硅胶等。 固定相：结合水 洗脱剂：苯酚、正丁醇等。 原 理： 洗脱剂洗脱时，加在柱上端 的氨基酸混合样品在两相之 间连序分配，以不同的速度 向下移动，分部收集柱下端 的洗脱液，再用茚三酮显色 定量。 (3)离子交换层析 支持剂：离子交换树脂（球形的颗粒） 离子交换树脂基质：具有酸性或碱性基团的人工合成聚苯乙烯-苯二乙烯高分子化合物。 带电基团：是通过后来的化学反应引入 基质的。 类 型：阳离子交换树脂 阴离子交换树脂 原理： 阳离子交换树脂：含有酸性基团如-SO3H (强酸性）或_COOH（弱酸性），可解离出H+,在酸性环境中，氨基酸的阳离子可与H+发生交换而结合到树脂上。 阴离子交换树脂：含有碱性基团如_N(CH3)3OH(强碱性）_NH3OH（弱碱性），可解离出_OH-，在碱性环境中能与溶液中的阴离子（氨基酸阴离子）交换而结合到树脂上。 磺酸型阳离子交换树脂 作用力： （1）静电吸引， （2）氨基酸侧链与树脂基质的疏水 相互作用。 在PH3左右，AA与阳离子交换树脂之间的静电吸引力的大小次序： 碱性氨基酸（R2+) 中性氨基酸R+ 酸性氨基酸R0, 洗出顺序为：酸性氨基酸、中性氨基酸、碱性氨基 酸。 离子交换层析 (4) 薄层层析 支持剂：纤维素粉、硅胶、氧化铝粉 基本步骤：铺板、点样、展层、现色、定性（定量） (5)气液层析（气相层析、气相色谱） 固定相：涂有薄层液体的惰性颗粒 流动相：H2、N2、CO2 前提：样品能汽化、热稳定 (6) 高效(压)液相层析(HPLC) 　固定相支持剂颗粒很细，因而表面积很大；溶剂系统采取高压，因此洗脱速度增大 。 因此多种类型的柱层析如分配层析、离子交换层析、吸附层析和 凝胶过滤层析都可以用HPLC 。 本节小结 1.20种氨基酸的结构特征；甘氨酸和脯氨酸结构 特点 2.酸性氨基酸与碱性氨基酸；必需氨基酸与非必 需基酸；极性氨基酸与