肝功能检查指标的选择与评价ppt课件.ppt

肝功能检查指标的选择与评价 一、实验目的 掌握：血清转氨酶、胆红素测定的方法和原理； 熟悉：重氮试剂法测定血清胆红素的操作步骤； 了解：血清转氨酶、胆红素测定的临床意义。 ALT、AST测定 测定方法：连续监测法、赖氏法 连续监测法测定丙氨酸氨基转移酶基本原理： L-丙氨酸+α-酮戊二酸 α-丙酮酸+L-谷氨酸 α-丙酮酸+NADH 乳酸+NAD+ 连续监测法测定天门冬氨酸氨基转移酶基本原理： L-天门冬氨酸+α-酮戊二酸 草酰乙酸+L-谷氨酸 草酰乙酸+NADH+H+ L-苹果酸+NAD+ 连续监测法测定NADH被氧化为NAD+,可在340nm处连续监测到NADH被氧化引起吸光度下降速率，该下降速率与ALT、AST活性呈正比。 二实验原理 ALT LDH AST MDH 三、试剂与器材 丙氨酸氨基转移酶试剂盒： R1: α-酮戊二酸、NADH、乳酸脱氢酶（LDH） R2：L-丙氨酸 、Tris缓冲液 天冬氨酸氨基转移酶试剂盒： R1: α-酮戊二酸、NADH、苹果酸脱氢酶（MDH）、 乳酸脱氢酶（LDH） R2：L-天门冬氨酸 、Tris缓冲液 四、操作步骤 1.试剂准备：取 10ml的R2，溶解一瓶R1，充分溶解后即为工作液。 2.仪器准备：水浴锅调温 37 ℃。紫外分光光度计，预热，波长340nm。 2.按表操作： 3. 混匀，37℃水浴1min，于空白管校零，精确读取1、2、3min吸光度，计算样本每分钟吸光度变化率△A/min。 注：为减小误差，可先把工作液37℃水浴5min，混匀直接上机检测。 加入物 空白管 样本管 血清 - 300uL 生理盐水 300uL - 工作液 3mL 3mL 五、结果计算 ALT或AST（U/L）=△A/min× × =△A/min× × 1000 ε Vt Vs 1000 6.22 Vt Vs △A/min为两次测定的平均值 Vt=反应总体积 Vs=血清体积 ε =6.22为NADH在340nm波长，比色皿光径1cm时的摩尔吸光系数。 六、参考范围 ALT（37℃）：男性≤40U/L 女性≤31U/L AST（37℃）：男性≤37U/L 女性≤31U/L 七、临床意义1.肝细胞损伤的灵敏指标2.肝癌、肝硬化3.某些化学药物引起的肝脏损害4.其他疾病或因素（肌炎、胸膜炎、肾炎、肺炎） 八、注意事项 1.血清不易反复冻融，避免影响酶活性； 2.避免标本溶血； 3.试剂变浑浊或者空白吸光度小于0.900，试剂不能使用。 TBIL、DBIL测定 结合胆红素 未结合胆红素+加速剂（破坏氢键） 二、实验原理 + 重氮试剂 偶氮胆红素 呈紫红色，测A546nm 重氮盐法：（亚硝酸钠、对氨基苯磺酸） 对氨基苯磺酸+HCL+NaNO2→氯化重氮苯磺酸+NaCL 三、试剂与器材 TBIL试剂R1主要成分：对氨基苯磺酸 盐酸 十二烷基三甲基氯化铵 DBIL试剂R1主要成分：EDTA 对氨基苯磺酸 盐酸 TBIL、DBIL试剂R2主要成分：亚硝酸钠 TBIL、DBIL校准品（2.0mL蒸馏水复溶后使用） 四操作步骤 TBIL测定： 1.TBIL工作液配制：取R1和R2按5:1的比例混合待用； 2.TBIL校准液配制：取2ml蒸馏水复溶待用； 3.按表操作： 4.混匀，37℃保温10min，于546nm测定“A”。 DBIL测定： 1.DBIL工作液配制：取R1和R2按40:1的比例混合待用； 2.DBIL校准液配制：取2ml蒸馏水复溶待用； 3.按表操作： 4.混匀，37℃保温2min，于546nm测定“A”。 加入物 空白管 校准管 测定管 血清 - -