脂质沉积性肌病白细胞脂滴ppt课件.ppt

脂质沉积性肌病外周血白细胞脂滴沉积的超微结构研究 福建医科大学附属第一医院神经内科 慕容慎行 王 柠 福建省泉州市第一医院神经内科 蔡 江 萍 脂质沉积性肌病( lipid storage myopathy, LSM )是由于肉毒碱（carnitine）或作用于脂质代谢的一些酶等缺乏，直接或间接地干扰了肌肉细胞内的脂质代谢，导致脂滴在肌纤维中的异常积聚而引起的肌病 LSM有许多不典型的临床表现，其诊断必须依靠肌肉病理检查。 但肌肉活组织检查，具有损伤性，不易重复，病人较难接受，不适于随访病人。 因此探讨LSM的其他辅助性诊断手段，配合肌肉活组织病理检查具有重要的临床意义。 研究现况 国外陆续有学者报道LSM患者的周围血液白细胞脂肪染色可观察到脂滴存在。但文献中未见进一步系统研究的报道。 国内在这一研究领域尚为空白。 研究目的 利用电镜检查较为深入地研究周围血液白细胞超微结构特征 探讨白细胞胞浆脂滴检测在LSM中的临床应用价值 研究对象 LSM患者8例，男3例，女5例；年龄：10-41岁，平均年龄20.9±9.7岁；病程2-12年。全部病例均经临床表现、实验室检查、电镜和病理组化等检查综合确诊。 健康对照者5名，男性2名，女性3名，年龄：23-44岁，平均年龄30.6±8.3岁。5位自愿者血清CPK、LDH、ALT、AST、Mb均正常，无遗传性疾病家族史。 临床资料 全部LSM病例均呈亚急性或慢性病程，复发者4例。 均以肌无力为首发症状，双侧对称性，近端肌肉受累严重，远端肌肉受累较轻。 各部位肌肉受累情况：下肢8例，上肢7例，肩胛带及骨盆带肌各7例，颈肌7例，咀嚼肌5例，吞咽肌2例，呼吸肌2例。 肌萎缩6例，肌痛及肌压痛5例， 有家族史5例。 实验室检查：CPK：241-3297 IU/L，LDH：303-3080IU/L，ALT：52-418IU/L，AST：31-717IU/L，3例Mb＞110μg/L。 肌电图均为肌源性损害。 研究方法 标本取材及制作：采血→离心→吸去上清液→加入3%戊二醛-1.5%多聚甲醛-0.1M磷酸盐缓冲液→4℃固定半小时→细切成长条状标本→ 4℃固定2小时以上→ 0.1M PBS漂洗三次→ 1%锇酸-1.5%亚铁氰化钾溶液4℃固定2小时→系列梯度酒精、丙酮脱水→定向包埋→超薄切片→电子染色。 电镜观察及细胞计数：Hu-12A型透射电镜观察并摄片。每份标本均按固定方向统一顺序计数50个中性粒细胞，统计沉积的脂滴总数和含有脂滴的阳性细胞数。 统计学分析 两组中性粒细胞含脂滴总数及含脂滴的中性粒细胞阳性率比较，若方差齐性采用t检验，若方差不齐采用t′检验，并用SPSS10.0软件包统计。 结 果 LSM患者： 周围血液白细胞胞浆中可见到脂滴存在，多圆形或椭圆形， 内容物接近透明，有的电子密度较高， 体积大小不等，直径约0.1-1.1μm， 同一个细胞中脂滴常为2-3个，有的细胞脂滴多达5个， 脂滴沉积以中性粒细胞明显，淋巴细胞及红细胞胞浆中未见脂滴。 健康对照者： 周围血液白细胞中脂滴极为罕见， 细胞中脂滴多为1个， 体积细小，直径约0.1-0.2μm。 表1　两组中性粒细胞中沉积的脂滴数 LSM组 健康对照组 序号 细胞总数（个） 脂滴数（个） 序 号 细胞总数（个） 脂滴数（个） 1 50 　29 1 50 　7 2 50 　67 2 50 　9 3 50 　41 3 50 13 4 50 　49 4 50 　8 5 50 　21 5 50 　5 6 50 　63 7 50 　24 8 50 　52 平均值* 43.25±17.47** 8.40±2.97 *平均值为同组数据的均值, **P＜0.01 表2 两组周围血含脂滴的中性粒细胞阳性率 LSM组 健康对照组 序号 细胞总数 （个） 阳性细胞数 （个） 阳性率 （%） 序号 细胞总数 （个） 阳性细胞数 （个） 阳性率 （%） 1 50 18 36 1 50 7 14 2 50 27 54 2 50 9 18 3 50 19 38 3 50 13 26 4 50 23 46 4 50 8 16 5 50 15 30 5 50 5 10 6 50 26 52 7 50 17 34 8 50 23 46 平均值* 42.00±8.75** 16.8