艾滋病实验室检测新技术 蒋岩 中国CDC性病艾滋病预防控制精品课件.ppt

艾滋病实验室检测新技术 蒋岩 中国CDC性病艾滋病预防控制中心 二十一世纪第二届全国性病暨皮肤病学术研讨会 2004年5月 中国南京 ;目的 方法 监测 感染检测 抗体检测(EIA/PA/RT) 检测策略 窗口期检测 抗原检测，核酸检测 pooling RT-PCR 诊断 感染诊断 WB 检测策略 近期感染诊断 STARSH方法 治疗评价 CD4/CD8测定 流氏仪检测 显微镜法 病毒载量测定 NASBA, b-DNA，RT-PCR 耐药性检测 基因型，表型 ;窗口期检测 抗原检测 核酸检测 Pooling RT-PCR方法;;抗原检测 P24试剂盒，第四代EIA试剂（1997年在欧洲正式批 准用于血液筛查） 每一个HIV粒子含有1200个p24抗原分子=0.048fg 每一个HIV粒子含有2个RNA拷贝，如果病毒载量测 定结果为400拷贝/ml，即等于有2.4X105个分子 =0.0096pg p24抗原/ml，800拷贝/ml，即等于有 4.8X105个分子==0.019pg p24抗原/ml 目前最敏感的抗原检测试剂盒的检测阈值为0.01pg/ml 抗原在血清抗体阳转前2-18天既可以检测到 ;样本（血清/浆）中的p24抗原包括游离的抗原和病毒粒子中的抗原 EIA测定的抗原浓度(F)：病毒RNA拷贝数推算的抗原浓度(A)=0.16：2900 样本号 EIA(Cutoff) EIA(pg/ml) RNA拷贝/ml p24pg/ml F/A 1 3.1 0.1 1,400 0.03 3.1 2 4.7 0.16 3700 0.09 1.8 3 45 1.5 1100 0.03 56 4 320 11 80000 1.9 5.6 5 68 2.3 40000 0.96 2.4 6 22 0.73 190000 4.5 0.16 样本经过预处理，破碎病毒粒子后将有利于p24抗原的检测 ;病毒RNA检测 第一次病毒学症高峰时间大约在感染后4-11天 病毒RNA检测方法：NASBA,RT-PCR,b-DNA 在高度怀疑有原发感染时，且经抗体检测之后 抗体检测阴性或不确定，有高危行为史或暴露 史，特别是伴有相应的临床表现时，用核酸检 测进行辅助诊断。 早期诊断应用： 个体检测、血液筛查、性病 门诊病人筛查、PMTCT ;Pooling RT-PCR 由于核酸检测的成本很高，方法费时，不可能作为血液筛查的方法，目前在欧洲用pooled血液的方法进行核酸检测，其敏感性取决于pooped样本大小及检测的预值（用特殊的RT-PCR试剂盒检测，以提高敏感性）。可能低于抗原检测，但在个体献血者核酸检测可能比抗原检测更具成本效益。 ;;;;;新近感染检测 抗体检测——EIA,PA,RT——WB试验 阴性——抗原检测/核酸检测 阳性——STARSH——新近感染 ;STARHS法 1998年开始，美国Janssen RS等专家推出一种新的实验室方法用于新感染病例的监测，即敏感的酶联免疫检测法（3A11）和非敏感的酶联免疫检测法（3A11—LS）: 原理：利用感染早期抗体滴度低的特征，以敏感ELISA试剂（3A11）和非敏感ELISA试剂（3A11-LS）对经过一定程度稀释的同一样品进行测定，3A11检测呈阳性而3A11—LS检测呈阴性反应者为新发感染，与以往感染的病例区分开来，可以确切地估测新感染人数。近几年，该方法已在一些国家得到了应用，为这些国家制定艾滋病预防控制策略提供了准确和重要的技术支持。;检测新发或新近HIV感染的目的;TARHS：新发HIV血清转换的血清检测运算法则 ;STARHS试验的窗口期 ; STARHS的应用条件 ;;;;;诊断替代策略 1、HIV感染高流行地区的高危人群 2、EIA-1+EIA-2+, 且2次检测S/CO大于等于6 3、在2检测结果的基础上+高特异性试剂检测+;衷心感谢参与本课题的研究人员和研究生 参比室工作人员： 强来英，肖瑶，张桂云，裴丽健，张辉 研究生/进修生： 张棋，左合拉，刘波，冯基刚;9$Lud(Pyh+SBk3WFo7#Jra%Mve)Qzi1TCl4XGp8!KtbNwf-RAj2VDm5YHq9$Lud*Oxg+SBk3WEn6ZIra%Mve(Pyh0TCl4XGo7#JsbN