H.E染色.doc

一、HE染液的配制：1、 ? ?Harris苏木素： 称取 苏木素精 ? 1g一氧化汞 ? 0.5g硫酸铝钾 ? 20g量取 无水乙醇 ? 10ml蒸馏水 ? ? 200ml?? 苏木素溶于无水乙醇，钾明矾溶于蒸馏水，二者混合后煮沸，离火，加入氧化汞，用玻棒搅拌，试剂变为深紫色，立即移入冷水快速冷却，静置一夜，过滤，棕色小磨口试剂瓶密封保存。使用前加入5%冰乙酸4ml（或冰乙酸3滴）。2、0.5%伊红(水溶性)： 称取 伊红 ? ? 0.5g量取 95%乙醇 25ml蒸馏水 ? 75ml??? 先取少量蒸馏水加入伊红，用玻棒将伊红碾碎并搅溶，再加入全部蒸馏水，完全溶解后，再加入乙醇，最后加入冰乙酸1滴。白色小磨口试剂瓶密封保存。3、1%盐酸水溶液：盐酸 ? ? 3ml蒸馏水 297ml 混匀，白色试剂瓶保存。4、中性树胶封片剂：往125ml棕色滴瓶中倒入中性树胶若干，加入二甲苯适量用吸管调匀，有一定粘稠度即可。试剂 : 二甲苯 ? ? 1瓶 ? ? ? ?? Harris苏木素染液?????? 无水乙醇???2瓶?????????1%盐酸水溶液?????? 95%乙醇 ?? 2瓶 ? ? ? ? 0.5%伊红(水溶性)染液 中性树胶封片剂二、染色步骤1、 电吹风吹片或烤片，至溶蜡；2、 入二甲苯（I）中脱蜡5分钟，用吸水纸吸干液体；3、 入二甲苯（II）中脱蜡10分钟（切片透明），用吸水纸吸干液体；4、 入100%乙醇（I）5分钟，用吸水纸吸干液体；5、 入100%乙醇（II）5分钟，用吸水纸吸干液体；6、 入95%乙醇3分钟；7、 入流水2分钟，用吸水纸吸干水分；8、 Harris苏木素 染色 4~8分钟；9、 自来水稍洗；10、1%盐酸水溶液分化5~10秒（切片由蓝变红）；11、自来水洗返蓝15~30分钟；12、0.5%伊红(水溶性)染色30秒~1分13、95%乙醇（I）脱水5分钟，用吸水纸吸干液体；14、95%乙醇（II）5分钟，用吸水纸吸干液体；15、入100%乙醇（I）5分钟，用吸水纸吸干液体；16、入100%乙醇（II）2分钟，用吸水纸吸干液体；17、入二甲苯（I）中透明2--3分钟，用吸水纸吸干液体；18、入二甲苯（II）中透明5分钟； 19、中性树胶封片。20、镜下观察结果：细胞核深蓝色，胞浆及纤维组织呈深浅不等的红色。三、注意事项1、苏木素染色时间应根据染液的新鲜或陈旧、及着色力决定。2、盐酸分化要恰当，分化不足，会核、浆共染，分化过度会造成核染色过浅。3、水洗蓝化时间应充分，以防褪色。4、封片后，玻片应及时贴上标签并写上编号。 常规制片（H.E）染色程序 ZT 一、HE染液的配制：1、? ?Harris苏木素： 称取 苏木素精? ?1g一氧化汞? ?0.5g硫酸铝钾? ?20g量取 无水乙醇? ?10ml蒸馏水? ???200ml苏木素溶于无水乙醇，钾明矾溶于蒸馏水，二者混合后煮沸，离火，加入氧化汞，用玻棒搅拌，试剂变为深紫色，立即移入冷水快速冷却，静置一夜，过滤，棕色小磨口试剂瓶密封保存。使用前加入5%冰乙酸4ml（或冰乙酸3滴）。2、0.5%伊红(水溶性)： 称取 伊红? ???0.5g量取 95%乙醇 25ml蒸馏水? ?75ml先取少量蒸馏水加入伊红，用玻棒将伊红碾碎并搅溶，再加入全部蒸馏水，完全溶解后，再加入乙醇，最后加入冰乙酸1滴。白色小磨口试剂瓶密封保存。3、1%盐酸水溶液：盐酸? ???3ml蒸馏水 297ml 混匀，白色试剂瓶保存。4、中性树胶封片剂：? ?? ???往125ml棕色滴瓶中倒入中性树胶若干，加入二甲苯适量用吸管调匀，有一定粘稠度即可。试剂 二甲苯? ???1瓶? ?? ?? ?Harris苏木素染液无水乙醇? ?2瓶? ?? ?? ?1%盐酸水溶液95%乙醇? ?2瓶? ?? ?? ?0.5%伊红(水溶性)染液 中性树胶封片剂二、染色步骤??1、 电吹风吹片或烤片，至溶蜡；2、 入二甲苯（I）中脱蜡5分钟，用吸水纸吸干液体；3、 入二甲苯（II）中脱蜡10分钟（切片透明），用吸水纸吸干液体；? ? 4、 入100%乙醇（I）5分钟，用吸水纸吸干液体；5、 入100%乙醇（II）5分钟，用吸水纸吸干液体； ? 6、 入95%乙醇3分钟；? 7、 入流水2分钟，用吸水纸吸干水分；? ? 8、 Harris苏木素 染色 4~8分钟；? 9、 自来水稍洗；10、1%盐酸水溶液分化5~10秒（切片由蓝变红）；11、自来水洗返蓝15~30分钟；12、0.5%伊红(水溶性)染色30秒~1分 13、95%乙醇（I）脱水5分钟，用吸水纸吸干液体；14、9