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(总论)5中药鉴定技术四大方法2
白头翁 委陵菜 新技术、新方法简介 1. DNA分子遗传标记技术; 2. 中药指纹图谱鉴定技术; 3. 高效毛细管电泳技术; 1、DNA 分子鉴定Identification of TCM by DNA Molecular Marker 20世纪90年代中后期开始; 解决形态鉴定的某些局限; 同属多来源药材的鉴别 道地药材的鉴别等 PCR (Polymerase chain reaction) PCR fragments Interested DNA sequences Primer Primer Identification of TCM by DNA Molecular Marker Extracts Genomic DNA TCM materials DNA sequencing 寻找特征性基因 PCR-RFLP DNA Chip Diagnostic PCR 高等植物中nrDNA基因重复单位的基本结构,P1、P2为PCR扩增的两引物 18S r DNA ITS ITS Spacer region AS AS-1 5S-rRNA Coding region Coding region 在高等植物中,5SDNA是编码5S核糖体RNA的多拷贝基因,以串联重复的形式存在,每个重复单位包括一个大约120bp的编码区和长度在100~700bp之间的转录间隔区 核糖体DNA(ribosome DNA,rDNA)基因片段 中药鉴定常用的基因 F.unibracteata F.cirrhosa F.przewalskii F.thunbergii 浙贝母 川贝母及其伪品浙贝母幼小鳞茎的性状和显微特征 两者性状和显微特征难以区别 浙贝母的鉴别性PCR鉴定 上游引物:Fth-P3: 5’- GGT GAG ATT AGA TCA TAA TTT CGG TG -3’ 329 下游引物:Fth-P2: 5’-TAT TAG CAT TAA TCG ATC GAA TTC-3’ 522 基于5S-rRNA 基因间区序列: 152(P1);522(P2);329(P3);505(P4) 300 400 500 FthP2、P3于60℃的扩增 243 M:100bp Ladder DNA 分子量标记, 1 浙贝母 2 东贝母 3 平贝母 4 伊贝母 5 新疆贝母 6 蒲圻贝母 7 蒲圻贝母 8 湖北贝母 9 梭砂贝母 10 暗紫贝母 11 甘肃贝母 12 卷叶贝母 13 紫花贝母 14 绿黄贝母 15 康定贝母 浙贝母 川贝母类药材的PCR-RFLP鉴定 nrDNA ITS区(含5.8S) 序列全长610bp 川贝类特异性序列: 5’- TGCCCGCCCT GCCCGGGACC TCGC–3’ 非川贝类 T 75bp ITS1区序列全长212bp 200 300 400 ITS1区SmaⅠ酶7 118 190 308 川贝类 川贝母 暗紫贝母 甘肃贝母 梭砂贝母 基于5S-rRNA基因间区序列 HinfⅠ梭砂贝母;BcnⅠ暗紫贝母 Primer Premier 金银花存在明显的道地性,同一物种产地不同质量差异明显 金银花道地药材的鉴定 金银花ITS区序列全长(含5.8S)616bp, 变异位点: 道地: GCCCCCCCGCCCCGCCTCCCACAGGGTCGCG 非道地: GCCCCCCCGCCCCGCTTCCCACAGGGTCGCG 近缘种 EcoNI 458bp 458bp 不同产地金银花及其近缘种PCR-RFLP分析结果 500 400 3008 708 461 247 A1为河南封丘,A2为河南新密,A3为山东平邑,A4为山东费县;B1为江苏南京,B2为湖南溆浦,B3为广东广州,B4为贵州贵阳,B5为重庆武隆,B6为云南昆明;C1为山银花,C2为毛花柱忍冬,C3为红腺忍冬 道地 非道地 近缘种 EcoNI Primer Premier The major 5?-cevane isosteroidal alkaloids in Beimu 中药贝母中含有的主要活性成分 川贝;新贝 湖贝;浙贝 To control active compounds (alkaloids) by TLC fingerprints I 伊贝母药材薄层色谱图 1、2阴性对照 3.西贝素甙对照品 4. 西贝素对照品 5. 样品990120yc 6. 样品990406yc 7. 样品9909
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