MF67M5HiperEMSAGelShiftKit凝胶迁移试剂盒-聚合美.DOC

M5 Hiper EMSA Gel Shift Kit 凝胶迁移 试剂盒使用说明书 产品名称 单位 货号 M5 Hiper EMSA Gel Shift Kit 100T MF672-01 【储存条件】 -20°C 【产品简介】 EMSA/Gel-Shift试剂盒(EMSA/Gel-Shift Kit)是用于EMSA(也称gel shift)研究的一个试剂盒。通过EMSA可以研究目的蛋白和特定的DNA序列的结合情况，从而可以研究细胞内一些转录因子的激活水平。本试剂盒提供了进行EMSA实验的探针标记、蛋白和DNA结合以及EMSA上样等的主要试剂，使EMSA实验变得简单方便。 EMSA/Gel-Shift 结合缓冲液(5X)中含有poly(dI-dC)等有效成分。其中poly(dI-dC)的浓度经过优化，可以很好的消除蛋白和标记探针间的非特异性结合，同时又不会减弱目的转录因子和标记探针间的结合。 每个EMSA/Gel-Shift试剂盒足够标记10-20次探针，足够进行100个蛋白和探针的结合反应。 【注意事项】 1. 需自备待标记的EMSA探针，需自备用于探针标记的同位素，需自备EMSA胶配制的相关试剂。 2. 细胞核蛋白的抽提可以使用聚合美生产的细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒(MF189)。 3. 如需做super-shift，需自备用于super-shift的抗体。 4. 本实验涉及到同位素的操作，请严格按照同位素的相关管理条例进行操作。 5. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。 6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 【产品组成】 MF672-1 T4 Polynucleotide Kinase 100U MF672-2 T4 Polynucleotide Kinase Buffer (10X) 100μl MF672-3 Nuclease-Free Water 1ml MF672-4 探针标记终止液 100μl MF672-5 5M 醋酸铵 600μl MF672-6 EMSA/Gel-Shift结合缓冲液(5X) 200μl MF672-7 EMSA/Gel-Shift上样缓冲液(蓝色，10X) 200μl MF672-8 EMSA/Gel-Shift上样缓冲液(无色，10X) 200μl MF672-9 TE 1ml/管， 共2管 【操作步骤】 一. 探针的标记： 1. 如下设置探针标记的反应体系： 待标记探针(1.75pmol/μl) 2μl T4 Polynucleotide Kinase Buffer (10X) 1μl Nuclease-Free Water 5μl [γ-32P]ATP (3,000Ci/mmol at 10mCi/ml) 1μl T4 Polynucleotide Kinase (5-10u/μl) 1μl 总体积 10μl 按照上述反应体系依次加入各种试剂，加入同位素后，Vortex混匀，再加入T4 Polynucleotide Kinase，混匀。 2. 使用水浴或 PCR 仪，37oC 反应 10 分钟。 3. 加入 1μl探针标记终止液，混匀，终止探针标记反应。 4. 再加入 89μl TE，混匀。此时可以取少量探针用于检测标记的效率。通常标记的效率在 30%以上，即总放 射性的 30%以上标记到了探针上。为实验简便起见，通常不必测定探针的标记效率。 5. 标记好的探针最好立即使用，最长使用时间一般不宜超过 3 天。标记好的探针可以保存在-20oC。 二. 探针的纯化： 通常为实验简便起见，可以不必纯化标记好的探针。在有些时候，纯化后的探针会改善EMSA的电泳结果。如需纯化，可以按照如下步骤操作： 1. 对于100μl标记好的探针，加入1/4体积即25μl的5M醋酸铵，再加入2体积即200μl的无水乙醇，混匀。 2. 在-70oC至-80oC沉淀1小时，或在-20oC沉淀过夜。 3.