分光光度法测定尿中杀虫脒及对氯邻甲苯胺课件.ppt

实验十三 分光光度法测定尿  中杀虫脒及对氯邻甲苯胺 预防医学实验教学中心 一. 目的要求 1.掌握尿中杀虫脒及对氯邻甲苯胺的分光光度测定原理及方法。 2.熟悉分光光度法测定尿中杀虫脒及对氯邻甲苯胺的样品处理方法。 二. 原理 尿中杀虫脒及对氯邻甲苯胺在碱性条件下 用石油醚萃取， 用盐酸溶液从有机相中反萃取，将酸萃取液中和后， 经重氮化、 偶合生成紫红色染料;在552nm波长下比色定量。 三. 实验器材 器材：分光光度计； 10ml具塞比色管； 250ml、150ml分液漏斗； 500聚乙烯塑料瓶。 恒温水浴箱； 尿比重计(1.020)。 四. 方法步骤 1.样品采集 用聚氯乙烯瓶收集接触杀虫脒后的次日晨尿至少200ml，尽快测定比重后，每100ml尿样加入1ml盐酸，于4℃冰箱内存放，至少可保存两周。分析前要将尿样彻底摇匀。 2.样品处理 取100ml尿样于分液漏斗中，加5.0ml氢氧化钠溶液，摇匀，加30ml石油醚，摇2min 静置分层后，弃去尿液， 加15ml饱和氯化钠溶液洗涤石油醚层，洗至醚层无尿色为止， 将醚层移入150ml分液漏斗中； 用盐酸溶液萃取醚层3次，每次2.0ml，振摇1min，静置分层后 收集盐酸溶液层于同一具塞试管中 加1滴酚酞溶液，用氢氧化钠溶液调至红色，再用盐酸溶液调至无色，加水至10ml，混匀 为样品萃取液。 表1 对氯邻甲苯胺标准曲线的制备及尿样测定 加入物（ml） 空白管 1 2 3 4 5 尿样 标准应用液 － 0.1 0.5 1.0 1.5 2.0 0 蒸馏水 2.0 1.9 1.5 1.0 0.5 – 0 对氯邻甲苯胺含量(ug) 0.0 1.0 5.0 10.0 15.0 20.0 – 尿样 – – – – – – 2.0 氢氧化钠溶液 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 盐酸乙醇溶液 （混匀） 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 亚硝酸钠溶液（混匀置5分钟）0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 氨基磺酸铵液（混匀置20分钟）1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 盐酸萘乙二胺液 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 （混匀置30分钟） 于552nm波长下，试剂空白为参比，测量吸光度值；以对氯邻甲苯胺含量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。 A 0.5 0.3 0.1  1.0 5.0 10.0 15.0 20.0 ug 绘制标准曲线见图 五. 计算： 按下式计算尿中对氯邻甲苯胺的浓度： 式中：c为尿中对氯邻甲苯胺的浓度，mg/L; a为由标准曲线上查得的对氯邻甲苯胺的含量，μg; V为取尿样体积，ml; k为尿样换算成标准比重时的浓度校正系数。 (尿样比重为1.020； k=1) 六. 注意事项 1.接触杀虫脒后，尿中杀虫脒排泄量随时间的延长而增加，于8～14h达最高值，故最好采集晨尿。 2.芳胺类化合物均可发生类似反应产生有色化合物。苯胺、硝基苯等化合物的接触者尿中都可能出现芳胺类化合物，所以收集尿样时必须询问是否接触或服用过该类药物，以免发生错误。 * 中毒体征： * 中毒体征：