分子免疫学细胞子及其受体GAOBO 2014.ppt

扩增92bp cDNA做为探针 筛选原始文库 获猴IL-15阳性克隆 筛选人cDNA文库 获得人IL-15 （PCR） 5’ 3’ 细胞因子和受体相互关系的研究 利用酵母双杂交系统研究蛋白与蛋白相互关系 酵母 A B C 酵母双杂交系统的建立基于“真核生物调控转录起始”。 酵母双杂交系统的建立与发展 酵母双杂交系统的建立基于“真核生物调控转录起始”。 酵母转录子Gal4分子由一条多肽链组成，含有881个氨基酸。它有两个结构域： 1、 DNA结合结构域（DNA binding domain, DB ）由位于 N-末端1~147个氨基酸构成，能识别位于Gal 1基因的上游激活序列（UAS, upstream activating sequence）,此外， 在其N-端还具有一段核定位序列； 2、转录激活结构域（activation domain, AD）由位于C-末端的768~881位氨基酸构成。 当Gal4 的两个结构域位于不同肽链上，只要它们在空间上充分接近，则能够恢复Gal4作为转录因子的活性. 酵母转录子Gal4分子 768~881 AD (activation domain) Gal 1基因 UAS（上游激活序列） Gal 1基因 UAS N C 1~147 DB 768~881 AD N C 激活转录 1-147 DB（DNA binding domain ） Fields等人的工作标志双杂交系统的正式建立 他们以与调控SUC2基因有关的两个蛋白质Snf1和Snf2为模型， 将前者与Ga14的DB结构域融合，另一个与Ga14的AD结构域的酸性区域结合。（形成融合蛋白） Snf1 Snf2 Ga14的DB Ga14的AD 诱饵 (bait) 猎物或靶蛋白 (prey or target protein) 如果Snf1和Snf2之间存在相互作用，那么分别位于这两个融合蛋白上的DB和AD就能重新形成有活性的转录激活因子，从而激活相应基因的转录与表达。 这个被激活的、能显示“诱饵”和“猎物”相互作用的基因称为报道基因（reporter gene） X Y Ga14的DB Ga14的AD 诱饵(bait) 猎物(prey) 报道基因 表达 报道基因的基因产物 通过对报道基因表达产物的检测，反过来可判别作为“诱饵”和“猎物”的两个蛋白之间是否可存在相互作用。 K Ga14的DB R Ga14的AD 融合蛋白 表达融合蛋白的载体 URA3 转化酵母菌 URA3 同时转化了细胞因子（已知）和 细胞因子的受体（未知）融合表达载体的酵母细胞才有?-半乳糖苷酶的活性，单独转化其中任何一个载体都不能检测出?-半乳糖苷酶的活性。 表达?-半乳糖苷酶 * * -S-S- -S-S- -S-S- CC C C C1C3C2 C1C3C2 C1C3C2 C1C3C2 G 蛋白 免疫球蛋白超家族受体 I类细胞因子受体 II类细胞因子受体 TNF-R 趋化因子受体 IL-1 M-CSF C-kit IL-2 IL-3 IL-4 IL-5 IL-6 IL-7 IL-9 IL-11 IL-12 IL-13 IL-15 OSM GM-CSF G-CSF LIF CNTF 生长激素催乳素 IFN-a IFN-b IFN-g TNF-a TNF-b CD40 神经生长因子（NGF） FAS IL-8 RANTES MIP-1 PF4 MCAF NAP-2 细胞因子受体根据其胞外结构及氨基酸序列的相似性分为5个家族。 细胞因子受体 细胞因子的主要生物学效应 介导天然免疫和炎症反应 介导和调节特异性免疫应答 决定免疫应答的类型 参与造血 介导天然免疫和炎症反应 多种细胞因子参与天然免疫和炎症反应的启动及其效应。其中，IL-6、IL-1、IFN、TNF和趋化因子家族是启动抗菌性炎症反应的关键因子，被称为促炎因子。 细胞因子的主要生物学效应 介导天然免疫和炎症反应 IL-8 趋化中性粒细胞和T细胞进入感染部位 趋化因子（IL-8) 细胞因子的主要生物学效应 介导天然免疫和炎症反应 IL-1、6 活化淋巴细胞、NK细胞 TNF- a 增加血管通透性 在炎症早期IL-6、IL-1、TNF还可促进肝脏产生急性期蛋白，增强机体抵御致病微生物的侵袭。 肝脏 TNF-a, IL-1, IL-6 血清淀粉样蛋白 C反应蛋白 纤维蛋白原 甘露聚糖结 合凝集素 细胞因子诱导急性期蛋白合成 细胞因子的主要生物学效应 介导天然免疫和炎症反应 干扰素可抑制病毒在体内复制并抗病毒感染