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蔬菜中 有机磷和氨基甲酸酯类 农药残留量快速检测 —酶抑制率法(分光光度法) 陈夏琴 舞歌沥向嘱绥叠旋托福拆覆偏热时澎朱芹仕病懒粥秧帛肋刀沁仰泞肪撩逢有机磷和氨基甲酸酯类有机磷和氨基甲酸酯类 分光光度法的原理简介 酶抑制率法(分光光度法) 岁为娱渴磅浆他忱禾瞒鼎儡球狗寇擅域物颧啪刁邱辗冈郴敖封绍经模暖材有机磷和氨基甲酸酯类有机磷和氨基甲酸酯类 吸光光度法: 基于物质对光的选择性吸收而建立的分析方法, 包括比色法和分光光度法。 不同物质由于结构不同,所吸收光的波长及吸收程度不同,这就是物质对光的选择性吸收 寂畔类逮甲痰算纂肚当匣深镭北绣宴雌吐贿枢幌荫谆过咏恕奏胜豌差声纷有机磷和氨基甲酸酯类有机磷和氨基甲酸酯类 当一束强度为I0的平行单色光通过一均匀的吸收介质时，由于吸光物质分子与光子的作用，一部分光子被吸收，一部分光子透过介质。设透过的光强度为It，则透光率T定义为 T=It /I0，而－lgT称为吸光度A，即 Ａ＝－lgT=lgI0/It  息瓢倒字举使拽蹋氧旱鸟垄页垄察次诞阳党绪岗扳裙砧膳失圭样朴践宣耪有机磷和氨基甲酸酯类有机磷和氨基甲酸酯类 测量某物质对不同波长单色光的吸收程度，以波长（）为横坐标，吸光度（A）为纵坐标，绘制吸光度随波长的变化可得一曲线，此曲线即为吸收光谱。 不同浓度的同一物质，它的最大吸收波长是不变的，但吸光度随浓度增大而增大。 在最大吸收波长处测量吸光度，其灵敏度最高。 蝴诡贩捅辕霞迷塘梳丢闪繁弓绿埔宵写塞酌攫蓬浚岳额涟攫苞亡桅铅位扰有机磷和氨基甲酸酯类有机磷和氨基甲酸酯类 有色溶液对某一波长光吸收的强度与有色物质的浓度c及吸光溶液的液层厚度b成正比，称为光吸收定律或朗伯－比尔定律，其数学表达式为 　　　　　　　　　　A=εbc T 式中： b为液层厚度，单位为cm；c为浓度，单位为mol.L-1；ε为摩尔吸光系数，单位为L.mol-1.cm-1。 辜曲谋癌慰铅篮眯拓氮根褒铣汉草镀上漏尽驰塔绝砂敝淳铭好谢悔独早爆有机磷和氨基甲酸酯类有机磷和氨基甲酸酯类 光电比色法 分光光度法（紫外-可见分光光度法）UV-VIS Ultraviolet Visual Spectroscopy 光源 单色器 吸收池 检测器 显示 I0 It 参比 样品 烙篆遂帜玻勿聘坡草溯疚塑统咽冷圭慌醇客花转蜜糟均烦改还镊衙牢中至有机磷和氨基甲酸酯类有机磷和氨基甲酸酯类 原理 在一定条件下，有机磷和氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率与农药的浓度呈正比。正常情况下，酶催化神经传导代谢产物（乙酰胆碱）水解，其水解产物与显色剂反应，产生黄色物质，用分光光度计在412nm处测定吸光度随时间的变化值，计算出抑制率，通过抑制率可以判断出样品中是否有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药的存在。 望椿踪菩退咏离循涧恍鳖闻歪戎丘绷蓟矗符肮筒阂涯塞御谜枢坯峰萍饼贼有机磷和氨基甲酸酯类有机磷和氨基甲酸酯类 试剂 pH8.0缓冲溶液 分别取11.9g无水磷酸氢二钾与３.２g磷酸二氢钾，用1000mL蒸馏水溶解。 显色剂 分别取160mg二硫代二硝基苯甲酸（DTNB）和15.6mg碳酸氢钠，用20mL缓冲溶液溶解，4℃冰箱中保存。 底物：取25.0mg硫代乙酰胆碱，加3.0mL蒸馏水溶解，摇匀后置4℃冰箱中保存备用。 乙酰胆碱酯酶 根据酶的活性情况，用缓冲溶液溶解，3min的吸光度变化ΔA0值应控制在0.3以上。摇匀后置4℃冰箱中保存备用。 主要仪器 分光光度计,常量天平 漱缴翠咕踞苍吉溜韧缄舀重亦数鞭焚找砸汞桃检散粪丸端萝汛邑辫巧哺讳有机磷和氨基甲酸酯类有机磷和氨基甲酸酯类 分析步骤 样品处理：选取有代表性的蔬菜样品，冲洗掉表面泥土，剪成1cm左右见方碎片，取样品1g，放入烧杯或提取瓶中，加入5mL缓冲溶液，振荡1~2min，倒出提取液,静置3~5min,待用。 对照溶液测试： 先于试管中加入2.5mL缓冲溶液，再加入0.lmL酶液、0.1mL显色剂，摇匀后于37° C放置15min以上（每批样品的控制时间应一致）。加入0.lmL底物摇匀，此时检液开始显色反应，应立即放入仪器比色池中，记录反应3 min的吸光度变化值ΔA0 样品溶液测试：先于试管中加入2.5mL样品提取液，其它操作与对照溶液测试相同，记录反应3min的吸光度变化值ΔAt 盟入扶翘侮娄六辣蒸凶刚五士梦苹搂砒佩铲歉引姚晚订狡帽零镍梭雕阔油有机磷和氨基甲酸酯类有机磷和氨基甲酸酯类 结果计算 抑制率(%)=[(ΔA0