遗传病的治疗21.ppt

应用DNA和RNA的碱基互补可形成同源或异源双链的原理，人工合成反义RNA（或DNA），和mRNA互补，使其灭活，阻止其翻译成蛋白质，达到治疗疾病的目的。 反义寡核苷酸技术 饮食疗法 92%：智力低下 73%：小头畸形 12%：先天性心脏病 苯丙酮尿症与怀孕妇女 基因治疗 基因治疗(gene therapy)：运用DNA重组技术设法修复患者细胞中有缺陷的基因，使细胞恢复正常功能而达到治疗遗传病的目的。 基因治疗的策略 基因修正(gene correction)：定点导入外源正常基因，代替有缺陷的基因，对靶细胞基因组无任何改变。属于直接治疗。 基因添加(gene augmentation)：非定点导入外源正常基因，而没有去除或修复有缺陷的基因。属于间接治疗。 体细胞基因治疗：使患者症状消失或得到缓解，但有害基因仍能传给后代。 基因治疗的基本方式 生殖细胞基因治疗：可根治遗传病，使有害基因不再在人群中散布。 体细胞基因治疗：使患者症状消失或得到缓解，但有害基因仍能传给后代。 基因治疗的基本方式 外源基因高效正确的表达 外源基因的安全导入 基因治疗的关键 疾病的发病机制及相应基因的结构功能清楚 基因治疗的条件 已克隆正常基因，且明确该基因表达与调控机制 导入基因具有合适的受体细胞，并能有效表达 具有安全有效的转运载体和方法 直接注射法 目的基因的转移方法 物理方法 电穿孔法 微粒子轰击法 直接注射法 目的基因的转移方法 物理方法 CaCl2共沉淀法 化学方法 目的基因的转移方法 物理方法 膜融合法 人工脂质体 红细胞影泡 微细胞 原生质球 化学方法 目的基因的转移方法 物理方法 受体载体转移法 膜融合法 化学方法 目的基因的转移方法 物理方法 优点 稳定 可携带大片段外源DNA 可选择特异的靶细胞 无免疫原性 膜融合法 受体载体转移法 膜融合法 受体载体转移法 缺点 转染效率较低 瞬时表达 血清抑制 同源重组法 受体载体转移法 膜融合法 化学方法 目的基因的转移方法 物理方法 同源重组法 同源重组法(homologous recombination)是将外源性目的基因定位导入受体细胞的染色体上，通过与该座位的同源序列交换，使外源性DNA片段取代原位点上的缺陷基因，达到修复缺陷基因的目的。 同源重组法 ?? Xba I Bst I neo 13.1 Kb ? ? Xba I Xba I Bst I 11.1 Kb ? ?? neo ? Xba I Bst I Xba I Bst I Xba I 16.5 Kb 7.7 Kb Bst I 病毒介导转移法 同源重组法 受体载体转移法 膜融合法 化学方法 目的基因的转移方法 物理方法 病毒介导转移法 病毒介导基因转移(virus mediated gene transfer)是指以病毒为载体，将外源性目的基因通过基因重组技术，组装到病毒载体上，并使重组病毒感染受体宿主细胞，完成基因转移。 逆转录病毒(retrovirus) 优点 能高效转染宿主细胞，转染率可达100％ 宿主范围广泛 可转染大量细胞并长期停留，病毒基因和所载的外源基因都能表达 逆转录病毒(retrovirus) 缺点 病毒容量有限(7 kb) 随机插入 有致癌作用 5’ LTR LTR 3’ U3 R U5 U3 R U5 ? 小鼠白血病病毒(Mo-MLV) gag pol env 逆转录病毒载体的构建(缺陷型病毒) 逆转录病毒(retrovirus) 5’ LTR LTR 3’ U3 R U5 U3 R U5 ? 小鼠白血病病毒(Mo-MLV) 逆转录病毒载体的构建(缺陷型病毒) 逆转录病毒(retrovirus) 外源目的基因 RNA 逆转录病毒载体的包装 逆转录病毒(retrovirus) ?- Helper virus Packaging cell RNA Packaging protein Virus ?+ Recombinant virus DNA病毒 优点 插入DNA片段较长 宿主范围广，