第七单元超敏反应性疾病的免疫学检测课件.ppt

三、III型超敏反应免疫学检测项目及临床应用 1.III型超敏反应常见的免疫学检测项目 2.临床应用 抗原特异性免疫复合物检测方法的优点是特异性高，通过检测可以了解引起免疫复合物病的抗原，但在大多数情况下，免疫复合物中的抗原性质不太清楚或非常复杂，所以抗原特异性方法并不常用。抗原非特异性免疫复合物的检测仅是检测血清中循环免疫复合物，方法很多，其原理各不相同，用一种方法测定为阳性，另一种方法检测可能为阴性；但与免疫组化法一起检测，其意义就大得多。 四、IV型超敏反应免疫学检测项目及临床应用 1.IV型超敏反应常见的免疫学检测项目 皮肤试验，常用的方法是结核菌素皮试和斑贴试验 （patch test）。 2.临床应用 1）寻找变应原：斑贴试验主要用于寻找接触性皮炎变应原。 2）结核菌素皮试目的：①了解机体是否对结核杆菌有免疫力；②接种卡介苗后的免疫效果观察；③排除结核杆菌感染；④了解机体细胞免疫功能状况。 3）传染病的诊断 中南大学 张文玲 * * * * * * 操作步骤 撕开微柱凝胶卡密封纸，标记 加1%筛选红细胞50μl及受检者血清25μl 37℃孵育15min 离心机离心10min，1000r/min 观察结果，如红细胞悬浮在反应管顶部或凝胶中，则为阳性结果；反之，如红细胞沉于凝胶底部（管底尖部），则为阴性结果。 注意事项 1. 反应卡封口有损坏，管中干涸或有气泡时，不可使用。使用前必须清楚标记试剂卡,一定要空离心一次后备用。 2. 不要将试剂卡长期保存4℃，在此温度下，试剂卡中液体蒸发凝集于封口铝箔下，胶易干涸，应将试剂卡保存在18~22℃。 3. 细胞浓度为0.8%~1%，浓度过高或过低，均可减弱凝集强度。 4. 纤维蛋白可吸附部分红细胞，导致假阳性结果。 5. 细菌污染、不适宜储存或过期都能使试剂失效。 6. 须设阴、阳性对照。 7. 微柱凝胶管中出现溶血现象，特别提示为红细胞抗原抗体阳性反应，也不排除其它原因所致溶血，对此标本一定要认真分析。 结果分析 - 100%的红细胞沉在微管的底部 +/- 100%的红细胞沉在微管的下端1/3之内 1+ 80%的红细胞沉在微管的下端2/3之内 2+ 80%的红细胞沉在微管的上端2/3之内 3+ 80%的红细胞沉在微管的上端1/3之内 4+ 凝集的细胞全部处于微管的顶部 d.p. 双群 Hemo. 溶血 反应格局及判断标准 临床意义 间接Coombs试验用于检测患者游离血清中的不完全抗体。此实验多用于检测母体Rh（D）抗体，以便及早发现和避免新生儿溶血症的发生，亦可对红细胞不相容的输血所产生的血型抗体进行检测。 小结和讨论 1.检测抗红细胞不完全抗体的常用方法为抗球蛋白试验，又称为Coombs试验，直接Coombs试验用于检测患者红细胞上不完全抗体；间接Coombs试验用于检测患者游离血清中的不完全抗体。 2.Coombs试验阳性可见于自身免疫性溶血性贫血、冷凝集素综合征、药物诱发的免疫性溶血性贫血、新生儿同种免疫性溶血病、某些高球蛋白血症患者，如系统性红斑狼疮、类风湿、恶性肿瘤等。 思考题 1.新生儿溶血症发生的机制是什么？ 2.微柱凝胶免疫试验可能出现的结果有哪些，试分析原因？ 实验三 循环免疫复合物的检测 实验目的 1.掌握PEG比浊法检测循环免疫复合物的原理和方法。 2.熟悉循环免疫复合物检测的临床意义。 实验原理 本试验是检测抗原非特异性循环免疫复合物的一种方法。PEG是环氧乙烷和水的多聚物，为一种不带电荷的直链大分子多糖。终浓度为3%～4%的PEG能相对选择性地沉淀CIC。用分光光度计测定浊度，反应沉淀物含量。 实验材料 1.pH8.4 0.1mol/L 硼酸盐缓冲液（BB） 硼砂4.29g、硼酸3.40g，蒸馏水加至1000ml，溶解后用G3或G4号玻璃滤器过滤； 2.PEG-NaF稀释液 PEG6000 40.0g、NaF 10.0g、BB加至1000ml，溶解后用G3或G4号玻璃滤器过滤； 3.待检血清、微量加样器、试管、吸管及橡皮滴头等； 4.分光光度计。 加入物 测试管 对照管 BB（ml） — 2.0 PEG-NaF稀释液（ml） 2.0 — 待检血清（ml） 0.2 0.2 37℃水浴60min 分光光度计测A495nm值 操作步骤 注意事项 1.4%PEG能沉淀较小的CIC，2%PEG只能沉淀较大的CIC，但浓度大于5%，PEG选择性沉淀CIC的特性即行消失，导致假阳性的出现。 2.应注意实验温度变化对结果的影响，离心速度与时间也应严格掌握