天然药物化学(第二版）第四章谱分离法.ppt

操作步骤 电泳技术 电泳系统的组成包括电源（电泳仪）、电泳槽、恒温装置和观察、成像装置等。 操作步骤 制板 电泳技术 操作步骤 电泳技术 样品加入点样孔 上槽 下槽 缓冲液 标记染料 已被分离的组分 缓冲液 上样 电泳 染色 干柱色谱法 十一、干柱色谱法 干柱色谱法是指将干燥的填充剂直接装入色谱柱后进行色谱分离的方法。 此法具有分离效果好、设备简单、溶剂消耗量少、可以直接套用薄层色谱的最佳分离条件等优点，但填充剂的消耗量较大，适用于制备性分离。 气相色谱法 十二、气相色谱法 气相色谱法（gas chromatography，GC）是一种以气体作为流动相，利用混合物中各组分在气体与固定相之间吸附能力的不同或分配系数的差异而获得分离的色谱分离方法。 根据固定相的不同，可分为气-固吸附色谱及气-液分配色谱两类。其中，以气-液分配色谱的应用最为普遍。 Filters/Traps Air Hydrogen Gas Carrier Column Data system Syringe/Sampler Inlets Detectors Regulators H RESET 气相色谱法 气路系统 进样/分离/温控系统 检测/记录系统 操作步骤 气相色谱仪结构 气相色谱法 气相色谱法具有分离效率高、分析速度快、试样用量少、选择性好、应用范围广等优点，目前已广泛应用于石油化工、食品卫生及药物分析等领域。但气相色谱法也存在一些不足之处，如不适宜分离高沸点、热稳定性差、高极性的化合物，柱的载样量较小，无法进行大规模制备性分离等，在一定程度上限制了该法的应用。 由于气相色谱中流动相为气体，要求试样必须能够在一定温度下气化，故在天然药物化学成分的研究方面，特别适用于具有沸点低、易挥发特性的挥发油成分的分离、鉴定和定量分析，现已成为天然药物及其制剂中挥发性成分研究的重要手段之一。 高效液相色谱法 十三、高效液相色谱法 高效液相色谱法（heigh performance liquid chromatography，HPLC）是在经典液相色谱（柱色谱）和气相色谱的基础上发展而成的一种高效、快速、高灵敏的色谱分离方法。 其基本原理是根据被分离物质中各组分在固定相及流动相中的吸附能力、分配系数、离子交换作用或分子量大小的差异而获得分离。 高效液相色谱法 高效液相色谱装置的模式图 溶剂 贮瓶 加压泵 压力表 过滤器 阻尼器 进样装置 压力表 记录仪 收集器 检测器 色谱柱 预柱 溶剂 贮瓶 加压泵 压力表 过滤器 阻尼器 进样装置 压力表 记录仪 收集器 检测器 色谱柱 预柱 高效液相色谱法 由于采用了高效填充剂，并配以高压输液泵、高灵敏检测器、自动记录装置及自动收集装置，使高效液相色谱法的分离速度及效率均大大提高，更趋于仪器化、自动化，且适用范围广，在许多领域内都得到了广泛的应用。 用气相色谱法难以分离的物质如挥发性低、热稳定性差、分子量大的聚合物或高分子化合物及离子型化合物等，用HPLC均能获得分离。 制备型的HPLC能大量分离制备较纯的试样。 随着计算机技术的不断发展，使HPLC与质谱、核磁、红外等波谱技术的联用进展很快，色谱信息越来越得到充分的利用。在天然药物化学成分研究领域中，HPLC发挥着越来越重要的作用。 高效液相色谱法 实例分析 HPLC 法分离珙桐科喜树Camptotheca acuminate Decne中四种具抗肿瘤活性的喜树碱类似物。 固定相：十八烷基键合硅胶 移动相：55％甲醇-水 喜树碱衍生物的分离 羟基喜树碱 R1＝R2＝OH 10-甲氧基喜树碱 R1＝OH，R2＝OCH3 喜树碱 R1＝OH，R2＝H 脱氧喜树碱 R1＝R2＝H Ⅰ Ⅱ Ⅳ Ⅲ 色谱分离法 氧化铝色谱法 硅胶色谱法 聚酰胺色谱法 活性炭色谱法 离子交换色谱法 大孔吸附树脂法 适用于碱性或中性的亲脂性成分的分离。 适用于中性或酸性成分的分离。 适用于能与聚酰胺形成氢键吸附的化合物如黄酮类、鞣质等成分的分离。 适用于分离水溶性成分如氨基酸、糖类及某些苷类等，也适用于大量制备性分离。 适用于分离有解离能力的酸性、碱性及两性化合物。 适用于水溶性成分如皂苷的分离。 本 章 小 结 本 章 小 结 色谱分离法 凝胶色谱法 薄层色谱法 纸色谱法 电泳技术 干柱色谱法 气相色谱法 适用于天然药物化学成分中大小分子化合物的分离。 适用于天然药物各种化学成分的分离鉴定，并可配合柱色谱作跟踪分离，指导选择溶剂系统。 适用于极性成分的分离。 适用于生物碱、有机酸、氨基酸、蛋白质、糖