项目九血清学试验ppt课件.ppt

一、反应物自身因素 抗原:理化性状、表位种类和数目 抗体:来源、特异性、亲和性、效价 抗原的理化性状、抗原决定簇的数目和种类均可影响血清学反应结果 例如，可溶性抗原与相应抗体反应出现沉淀，而颗粒性抗原与相应抗体反应则出现凝集 1、抗原 抗体是血清学反应中的关键因素，对反应的影响表现在以下三个方面: (1)来源:来自不同动物的免疫血清，其反应性有差异。家兔等大多数动物的免疫血清具有较宽的等价带，通常在抗原过量时才易出现可溶性免疫复合物;马等大动物和人的免疫血清等价带较窄，少量的抗原或抗体过剩，均可形成可溶性免疫复合物 2、抗体 (2)特异性与亲和力: 特异性和亲和力是影响血清学反应的两个关键因素，它们共同影响试验结果的准确程度。用于诊断的试剂必须尽量选用特异性高、亲和力强的抗体，才能保证和提高试验结果的可靠性。 （3）浓度: 抗体的浓度往往是与抗原相对而言。合适的浓度才出现明显的反应现象。因此许多试验应进行抗体预滴定，找出最适反应浓度。 电解质: 生理盐水或缓冲液 酸碱度: pH6～pH9 温 度: 15℃～40℃，37℃最适 二、环境因素 l.电解质 抗原抗体结合后由亲水性变为疏水性，此时易受电解质影响，如有适当浓度电解质存在，就会使抗原抗体失去一部分电荷而相互凝集或沉淀，出现可见反应;若无电解质存在，则不出现可见反应。 通常在血清学试验中，以8.5g/LNaCl溶液作为抗原抗体的稀释液及反应液，其中Na+和Cl-可分别中和胶体颗粒上的电荷，使胶体颗粒的电势下降，形成可见的沉淀物或凝集物。但如果电解质浓度过高，则会出现非特异性蛋白质沉淀，即盐析。 2.酸碱度 合适的pH是抗原抗体反应的必要条件之一。血清学试验一般以pH6--9为宜，超出此范围可影响抗原和抗体的理化性质，导致假阳性或假阴性结果。当pH为3左右时，接近细菌抗原的等电点，可出现非特异性酸凝集，造成假象。 3.温度 抗原抗体反应一般在15一40℃范围内均可进行，最适温度为37℃。在此范围内温度越高，分子运动速度加快，增加抗原抗体接触机会，反应速度越快，但亦容易引起复合物解离;温度越低，反应速度缓慢，但抗原抗体结合牢固，易于观察。某些特殊的抗原抗体反应需要特定的温度，如冷凝集素在4℃时与红细胞结合，20℃以上反而解离。 4、作用时间 抗原抗体反应应有足够的时间，不同反应时间不同。 此外，抗原抗体反应在液相中反应时，适当振荡与搅拌，也可促进抗原抗体分子的接触，加速反应。 主要的抗原抗体反应 1、凝集反应（Agglutination) 2、沉淀反应(Precipitation) 3、补体结合试验(Complement fixation test ,CFT) 4、中和试验(Neutralization test) 1、凝集反应（Agglutination) 颗粒性抗原（完整的细菌细胞或红细胞等）与其相应的抗体在合适条件下反应并出现凝集团的现象。 用于凝集反应中的抗原称凝集原(agglutinogen)。 用于凝集反应中的抗体称凝集素（agglutinin)。 2、沉淀反应(Precipitation) 可溶性抗原（蛋白质、多糖或类脂溶液、血清、细菌抽提液、组织浸出液等）与其相应的抗体在合适条件下反应并出现沉淀物的现象。 用于沉淀反应中的抗原称沉淀原(precipitonogen)。 用于沉淀反应中的抗体称沉淀素（precipitin) 。 3、补体结合试验(Complement fixation test ,CFT) 有补体参与，并以绵羊血红细胞和溶血素（红细胞的特异抗体）作指标系统的灵敏度很高的抗原抗体反应。 4、中和试验(Neutralization test) 特异性抗体抑制多种抗原的生物学活性（细菌外毒素的毒性、酶的活性、病毒的感染性等）的反应。例如在临床实验诊断中测定风湿病患者体内的抗链球菌 O抗体的反应。 信阳农业高等专科学校生物技术系 免疫学 陈功轩 项目九 血清学试验 一、抗原(Antigen，Ag)? 能刺激机体产生特异性免疫应答，且能与其免疫应答产物(抗体或致敏淋巴细胞) 在体内或者体外结合，并发生一系列生物学效应的物质。 T细胞 B细胞 Ag T B T 浆细胞 致敏T细胞 抗体 （一）抗原的两种基本特性 1.免疫原性 指抗原分子能够刺激机体产生免疫应答(产生特异性抗体及免疫效应细胞)的性质。 Ag T B T 浆细胞 致敏T细胞 抗体 2.抗原性(又称免疫反应性) 指抗原分子与免疫应答产物(抗体或免疫效应细胞