生物化学实验课件AKTprime.ppt

AKTA PRIME PLUS 系统 一、色谱层析原理 1.凝胶过滤 2.离子交换层析 (IEX) 二、AKTA Prime 配置 1、AKTA Prime 主机 2、AKTA Prime 主要硬件组成 2、AKTA Prime 主要硬件组成 2、AKTA Prime 主要硬件组成 3、AKTA Prime 流程图 6.七通进样阀原理 三、面板操作按钮 1、进入菜单 3、操作命令简介 3、操作命令简介 四、AKTA Prime 数据采集——Prime View 1、Prime View 1）Prime View——数据采集 Prime View——数据采集 2）Prime View——数据处理 输出报告内容 积分结果——图谱及积分表 浏览属性 五、入门指南 -准备 (缓冲液 0.45u, 超声脱气75功率10－15min , 样品 0.45u, 柱子) -先打开 AKTA ，再开电脑，打开软件Prime View -水冲系统 (抽气) -连接柱子 -水冲柱子至少2倍柱子体积 -缓冲液A冲洗，打开紫外灯平衡柱子5倍柱子体积或紫外检测线稳定 -样品打入上样环 -上样阀切换到Inject 模式将样品打入柱子 -峰收集 -结束，重命名并转移结果，用Prime View evaluation编辑结果 -水冲洗2倍体积置换缓冲液 -20% EtOH 冲洗柱子5倍体积，保存柱子。 -关闭 AKTA和Prime View 延迟体积 六、AKTA PRIME PLUS日常保养 -所有样品、试剂必须过膜（0.45u）； -缓冲液温度平衡 -染菌缓冲液必须倒掉； -保证泵、柱前没有气泡； -密闭冲洗：每周更换 20% EtOH （5 ml/min，1h）； -系统总是保存在 20% EtOH中，不是缓冲液、盐溶液、有机溶剂； -清洗管路时关闭 UV -高压报警检查压力限制 可按自己的要求编辑报告格式 浏览曲线 X、Y轴 积分表 * * 目录 一、色谱层析原理 二、AKTA Prime 硬件配置 三、面板操作按钮 四、AKTA Prime 数据采集——Prime View 五、入门指南 六、AKTA PRIME PLUS日常保养 凝胶过滤层析 离子交换层析 疏水层析 亲和层析 1. 凝胶柱，凝胶颗粒 2.加样 3.样品和缓冲液进入凝胶柱， 分子扩散。 4.大分子蛋白首先流出，根据分子量大小依次流出 。 加样和冲洗 平衡 洗脱 再生 阴离子 交换柱 电导率 根据电荷差异进行分离 AKTA Prime + Recorder AKTA Prime + Prime View ?Flow rate range 0.1–50 ml/min in steps of 0.1 ml/min ?Operating pressure range 0–1.0 MPa 组分收集器 控制面板 系统泵 缓冲液阀 三通梯度配比阀 泵头 压力感应器 梯度混合器 上样阀 层析柱 检测流动池： 紫外、电导 收集切换阀 收集出口 柱夹槽口 4、AKTA Prime 阀梯度 通过梯度阀交替泵A/B液实现梯度 5、AKTA Prime 泵 自动清洗 如何手动抽气 三种工作状态： 1) LOAD 2) INJECT 3) WASTE 1）LOAD 缓冲液：泵－7－1－柱子 泵 柱子 样品环 注射器 样 品：注射器3－2－6－4－ 缓冲液 2）INJECT 样品：泵－7－6－2－1－ 泵 柱子 样品环 注射器 3）WASTE 缓冲液：泵－7－5－ 泵 柱子 样品环 注射器 按上下箭头，可选择菜单命令、调整参数等。 按OK进入子菜单； 按ESC退到上级菜单； 2、快捷键 分布收集器前进一管 停止程序或方法运行 梯度运行过程中，按此键，系统将保持当前浓度运行，而流速和分步收集继续，再按一下，继续梯度运行 按此键，系统暂停运行，包括泵和收集，再按一下，继续 主菜单 预编好的方法模板 运行保存的方法 手动运行 编辑方法 将方法拷入电脑或拷回 设定系统参数 检查系统状态 子菜单： 以Manual Run为例 设置横坐标单位是ml或min 设置B起始浓度%B 梯度（长度ml/目标浓度%B） 流速ml/min 收集单位ml、min、drop 收集数量（每管） 限压（保护层析柱）MPa 缓冲阀位1-8 样品阀位waste、load、inject 开始 电脑+软件（含数据线） + Recorder记录仪 Prime View 软件 数据采集 数据处理 运行曲线图谱（Curve）： 记录系统采集到的全部数据， 系统开始运行后，自动开始记 录，结束后，自动保存。 运行日志（Logbook）： 记录系统收到的所有指令 选择浏览曲线及 设定曲线颜色 设定X，Y轴的 坐标范围