分子生物2015五年制万敏20150930.pptx

1、克隆载体应具备的主要特点;（2）SD序列：提供核糖体结合位点 （3）转录终止序列：有助于高效表达外源基因;（一）目的DNA的分离获取（分）；;（一）目的DNA的分离获取（分）；;（3）通过其他措施产生黏端进行连接;（一）目的DNA的分离获取（分）；;（四）重组DNA转入受体细胞（转）;1、转化：质粒→细菌 质粒→酵母 感受态细胞： 细胞膜通透性增加，容易接受外源DNA的细菌。 2、转染：外源DNA →真核细胞 噬菌体DNA →细菌 3、感染：噬菌体颗粒→细菌 病毒颗粒→ 真核细胞;（一）目的DNA的分离获取（分）；;（一）目的DNA的分离获取（分）；;（1）抗生素抗性标志筛选载体;（1）抗生素抗性标志筛选载体;（2）插入失活/插入表达筛选重组载体;1、遗传标志筛选载体;1、遗传标志筛选载体;1、遗传标志筛选载体;1、遗传标志筛选载体;（3）标志补救筛选载体：α－互补;（3）标志补救筛选载体：α－互补;（3）标志补救筛选载体：蓝白筛选;1、遗传标志筛选载体;1、遗传标志筛选载体;1、遗传标志筛选载体;1、遗传标志筛选载体;1、遗传标志筛选载体;1、遗传标志筛选载体;2、序列特异性筛选重组DNA （1）限制性内切酶法： （2）PCR法：直接鉴定目的DNA的存在 （3）核酸杂交法：从文库中筛选目的DNA （4）DNA测序：最准确的鉴定方法;前提：重组DNA进入受体细胞后能表达其编码产物。原理：抗原-抗体反应或配体-受体反应。;（六）克隆基因的表达;（六）克隆基因的表达;原核表达系统;1、原核表达体系;;;;;1、原核表达体系;1、原核表达体系;1、原核表达体系;1、原核表达体系;1、原核表达体系;1、原核表达体系;（1）真核表达体系优点：;2、真核表达体系;（3）真核表达载体特点：;（3）真核表达载体：;真核表达体系;①可对蛋白质进行翻译后加工修饰； ②操作相对简单---已经商品化； ③可高水平表达外源基因产物； ④蛋白准确定位---如分泌到膜外。;哺乳动物细胞表达系统;第二十一章 DNA重组及重组DNA技术