《生理科学实验作业汇编》蟾蜍坐骨神经干动作电位的实验研究课件.ppt

一、蟾蜍坐骨神经干动作电位的实验研究 1.讲解和讨论：实验方法、观察项目、问题及假设 2.示范： 神经干制备、动作电位引导、数据测量 3.自主实验 4.数据汇总统计 5.讨论：对实验数据统计结果的分析与机制探讨 二、高仿实验:失血代偿 1.讲解 2.自主实验 3.讨论 三、教学过程体验调查 1、兴趣度，2、压力感，3、成就感 本堂课安排： 1.独立完成实验，不串岗，认真如实记录数据 2.遵守实验室规制制度，离开实验室须经教师许可 3. 数据资料用邮件发回，请不要使用移动存储器 4.器具须用水擦洗、擦干，按原样整齐放置 5.实验台须用湿的干净抹布擦拭干净。用品摆放整齐、关机 6.仿真实验完成后，关机、将椅子放回原位 7.第3、第4组值日：督查各组善后工作；扫地、拖地，凳子放整齐；清洁洗涤台、将动物尸体送动物中心 8.实验报告在2周内提交 注意事项： 蟾蜍坐骨神经干动作电位的实验研究 Experimental Research of Compound Action Potentials on Toad Sciatic Nerve Trunk 陆源 浙江大学医学院 1786年Galvani所做的双金属电极刺激蛙神经引起下肢收缩的实验 Galvani（1737～1798）意大利解剖医学家及物理学家 Introduction 检流计，1848年德国人发明 1850年，用检流计测得蟾蜍坐骨神经干动作电位的传导速度为20～30m/s electrode 1933年美国科学家 Gasser和 Erlanger用示波器对外周神经活动进行研究性总结，并发表了著名的论文《Electric signals of Nervous Activity》（1939年）。 阴极射线示波器，1897年德国人发明 细胞外记录（ Extracellular Recording）实验阶段 用示波器记录神经干动作电位 剑桥大学Hodgkin和Huxley应用金属微电极 对乌贼巨神经纤维电活动进行系统研究， Hodgkin和 Katz提出离子假说。 1949年，凌宁和Gerard 发明玻璃微电极。电压钳和膜片钳将电生理研究推向分子水平。 用玻璃微电极做细胞电生理实验 尖端直径0.5?m的玻璃微电极 细胞内记录（ intracellular Recording）实验阶段 目的（objective）： 测定蟾蜍坐骨神经干复合动作电位（compound action potential ，CAP） ，探讨蟾蜍坐骨神经干动作电位的特征、双相动作电位形成机制及神经损伤、药物对神经兴奋传导的影响。 1 材料和方法 (Materials and methods ) 1.1实验动物（laboratory animal) 蟾蜍（中华蟾蜍指名亚种，Zhuoshan Toad），性别、体重。 婚垫 雄蟾 雄蟾 雌蟾 1 材料和方法 (Materials and methods ) 1.2 药品(drug) 任氏液、4% 普鲁卡因、3 mol/L 氯化钾 任氏液由无机盐和蒸馏水配置而成，每升溶液含 NaCl 6.5 g、KCl 0.14 g、CaCl2 0.12 g,、NaHCO3 0.20 g、NaH2PO4 0.01 g。任氏液的理化特性与蛙的组织液近似。可用于蛙的组织、器官润湿和营养。 普鲁卡因：局部麻醉药，用于浸润麻醉、传导麻醉等。普鲁卡因与Na+通道内侧受体结合，使通道蛋白质构象变化，促使Na +通道失活状态闸门关闭。 1. 3 器材( Experimental apparatus) RM6240 生物信号处理系统(RM6240 multichannel physiological recording and processing system )（成都仪器厂）、神经标本盒（ nerve chamber )。 RM6240C微机生物信号处理系统 RM6240微机生物信号处理系统可以同时采集、放大、显示、记录、分析四路生物信号及一路刺激输出，12导联心电图输入记录，可用于人体和动物实验。全程控设置，具有很强的数据分析及输出功能。 神经干标本盒 S+ S- E R1 - R1+ R2- R2+ S+、S-刺激电极，E接地电极，r1- 、r1+和r2- 、r2+引导电极， 刺激电极 引导电极 引导电极 1.4 制备坐骨神经干（ preparation of sciatic nerve trunk ） 蟾蜍毁脑脊髓，去上肢和内脏，下肢剥皮浸于任氏液中。 蟾蜍下肢背面向上置于蛙板上，剪去尾椎；标本腹面向上，用玻璃