生物化学验课件生物化学实验32010.6.30.ppt

思考题 （二）还原糖的制备 (三) 样品总糖的水解和提取 1. 取1g玉米粉，放在100ml三角瓶中，加15ml水溶解，再加10ml 6mol/L 盐酸，混匀。 2. 将三角瓶置于沸水浴中加热煮沸30 min。 3.取出1~2滴置于白瓷板上，加1滴I-KI溶液检查水解是否完全。如已水解完全，则不呈现蓝色。 4.拿出三角瓶，冷却，加入1滴酚酞指示剂，混匀，用6mol/L的NaOH中和至溶液呈微红色。 5. 将中和后的溶液转入100ml的容量瓶中：过滤，定溶，充分混合，滤出液即为总糖提取液。 1. 取5支试管，编号，按下表向每支试管中加入试剂。 2. 用管1做对照，测定每管在540nm下的OD值。将结果记录在表中。 3. 根据还原糖和总糖的OD值，使用葡萄糖的标准工作曲线，计算还原糖和总糖的百分含量，即： 还原糖％= （从曲线中查出的还原糖的浓度×N ×V/样品重）×100% 总糖％= （从曲线中查出的总糖的浓度×N × V/样品重） ×100% ? ??N：稀释倍数； V：提取液体积 实验三 3, 5 - 二硝基水杨酸(DNS)法 测定总糖和还原糖 掌握还原糖和总糖测定的基本原理 掌握比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。 实验目的 还原糖包括哪些糖？测试还原糖的方法有哪些？ 总糖包括哪些化合物？如何测定？ 3,5－二硝基水杨酸(DNS)法的基本原理是什么？优点？ 3,5－二硝基水杨酸(DNS)法测定时为什么要设计空白管？ 实验原理 还原糖与非还原糖 还原性糖（Reducing sugar） —— 与斐林、土伦、本氏试剂呈正反应的糖 非还原性糖（Nonreducing sugar） ——无变旋、还原、成脎性质 在NaOH和丙三醇存在下，3,5-二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540nm波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。 本方法操作简便，快速，杂质干扰较少。 试管和试管架 碱滴定管（50ml） 铁架台 滴定管夹 吸量管（1ml和2ml） 容量瓶（100ml） 水浴锅 玻璃漏斗和烧杯。 三脚架 量筒 白瓷板 玻璃棒 实验器材 762 分光光度计 756 分光光度计 电子天平 恒温水浴 3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂：称取6.5g DNS溶于少量热蒸馏水中，溶解后移入1000ml容量瓶中，加入2mol/L氢氧化钠溶液325ml，再加入45g丙三醇，摇匀，冷却后定容至1000ml。 葡萄糖标准溶液：准确称取干燥恒重的葡萄糖100mg，加少量蒸馏水溶解后，再定容至100ml，即含葡萄糖为1.0mg/ml。 6 M HCl：取250ml浓HCl(35~38%) 蒸馏水稀释到500ml。 碘-碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。 6N NaOH：称120g NaOH溶于500ml蒸馏水中。 0.1% 酚酞指示剂。 实验材料 ：玉米粉 实验试剂 （一）葡萄糖标准曲线制作 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0.0 最终浓度（mg/ml） 0.2 0.8 4 0.0 1.0 5 0.4 0.6 3 0.6 0.4 2 0.8 0.2 1 1.0 0.0 0 OD540nm 蒸馏水（ml） 葡萄糖标准液（ml） 管号? 1. 取6个试管，按下表加入1.0mg/ml葡萄糖标准液和蒸馏水 实验操作： 2. 向各试管中分别加入DNS试剂1 ml，充分混合，放入沸水浴中加热煮沸2 min进行显色，取出试管放入盛有冷水的烧杯中迅速冷却。 3.向各管中分别加入8 ml蒸馏水，充分混合。 4.以空白管（0号管）做对照，于540nm 波长下调0，然后测定各管的OD?值。 5.以光吸收值作为纵坐标，葡萄糖含量为横坐标，绘制标准曲线。如果该直线不通过零点，必须重做。 1. 称取2g玉米粉，把它放入一个100ml的三角瓶中，然后加入50~60ml蒸馏水，搅拌均匀。 2. 把三角瓶放于一个50℃水浴中保温 30 min，不时搅拌。 3. 拿出三角瓶，将三角瓶内含物转入100ml的容量瓶中：过滤，定溶，充分混合，滤出液即为还原糖提取液。 （四）样品中含糖量的测定 0.5 0.5 0.0