丝虫病血清学检测技术课件.ppt

丝虫病血清学检测技术 广西疾病预防控制中心 张伟尉 一、快速免疫色谱试验（ICT） 利用快速免疫色谱技术, 以特异性多克隆抗体(PCAb ) 和单克隆抗体(MCAb ) 定性检测血中的班氏丝虫抗原。 在阳性样本中, 班氏丝虫抗原与胶体金标记的PCAb 形成复合物, 被薄膜上的MCAb 捕获, 形成一条粉红色线。在阴性样本中, 薄膜上的MCAb 不会捕获任何PCAb , 因此不会形成粉红色线。 （二）ICT卡的优点 作为一种高科技产品, 直接用于检测末梢血, 使用简便快捷, 结果直观, 不需抽静脉血,且不受采血时间限制, 群众易接受。 效果稳定，结果未显示有假阳性, 也没有出现无效结果。 （三）操作方法 1. 打开测试卡，移去粘胶衬里。 2. 利用毛细管的虹吸作用，从耳垂或手指取血，使毛细管内血量吸至100ul刻度线。 3. 将100ul全血从毛细管加到测试卡粉红色和白色垫的顶部。 4. 等垫子的粉红色部分完全浸透血清（约需30s~1min）后关闭测试卡。为保证测试结果，应用力压紧测试卡视窗右边区域，并开始计时。 操作流程 （四）结果判断 关闭测试卡2min后，通过测试卡视窗读结果。 若在视窗内见到2条线（对照线和测试线），则结果为阳性；如只有对照线显示，则结果为阴性。如果对照线不显示，则测试无效，应重新进行测试。 （五）注意事项 1.ICT卡不适用于检测马来丝虫病。 2.用100 Ll 标定毛细管收集血样时, 如有气泡, 收集血量应超过100 Ll 线以作补偿。 3.如是弱阳性血样，应从关闭测试卡15min后再做记录，以确定阴性结果 。 二、丝虫特异IgG4抗体试验 将抗原或抗体与底物（酶）结合，使其保持免疫反应和酶的活性。把标记的抗原或抗体与包被于固相载体上的配体结合，再使之与相应的无色底物作用而显示颜色，根据显色深浅程度目测或用酶标仪测定OD值判定结果。 （二）操作方法 1. 血清样本按1：40稀释，滤纸血样本按直径1.1cm圆片加400ul样本稀释液，37℃浸泡2h（或4℃过夜）稀释处理。 2.取已稀释的样本100ul加入反应板孔内，同时设阴性、阳性及空白对照各1孔，37℃反应90min后甩去孔内液体，用洗涤液加满各孔，静置30s后甩去，共洗5次，最后一次拍干。 3.除空白对照孔外每孔加抗人IgG4酶结合物2滴，37℃反应90min后甩干孔内液体。同上洗涤。 4. 将底物干粉完全溶解于底物稀释液中，各孔加入底物溶液2滴，37℃30min后加1滴终止液终止反应，混匀，观察结果。 操作流程 （三）结果判断 肉眼观察：当阴性对照孔无色或微黄色，阳性对照孔呈明显黄色时，试验有效。待检样品孔颜色呈明显深于阴性对照的黄色即判为阳性。 仪器检测：应用酶标仪以空白对照孔调零，在波长405nm处读取各孔OD值。以样本OD≥阴性对照OD值的2.1倍为阳性，若阴性对照OD值不足0.07，按0.07计算。 Thanks * * （一）原理 结果判定图 （一）原理 血清稀释 加入反应孔，同时 设阴性、阳性及空白对照 洗板，除空白外 每孔加IgG4酶结合物 加入终止液 洗板，加入底物 结果判定 滤纸血37℃浸泡2h（或4℃过夜） 37℃反应90min 37℃反应90min 37℃反应30min