分子医学能02电泳总DNAHBV PCRSSCP PCR.ppt

实验二PCR检测乙肝病毒PCR-SSCP检测人HLA-DRB基因多态性 乙肝病毒PCR实验操作 HLA基因PCR实验操作 血清样本处理 （模板的制备） PCR检测乙肝病毒实验 PCR反应上机 口腔细胞DNA电泳 （模板的检测） HLA基因PCR实验操作 PCR反应上机 琼脂糖凝胶板的制备 （封板、梳子位置与高度、凝固后拔梳）  倒缓冲液 （样品中加入1/5体积的上样buffer） 加样，电泳（方向、电压、时间）  染色与检测 （EB浸泡10 min，紫外下检测） 电泳实验的步骤及注意事项 电泳基本原理及相关知识 DNA琼脂糖凝胶电泳 ? 电泳的概念 带电粒子（胶体颗粒、离子等）在电场的作用下在特定的介质中向与其电荷性质相反的电极方向定向泳动的现象。 广泛应用于生物大分子的分离和鉴定 ? 实验室中常用到的电泳方法 （以介质分类） ? 纸电泳 ? 醋酸纤维膜电泳 ? 凝胶电泳 琼脂糖凝胶电泳 聚丙烯酰胺凝胶电泳 ? 电泳的基本原理 利用物质的差异特性来分离物质 电荷差异 电荷性质 电荷数量 分子差异 分子大小 分子形状 ? 电泳的影响因素 ? 带电粒子的性质 ? 电场强度 ? 溶液的pH ? 溶液的离子强度 ? 电渗现象 ? 环境因素 在pH8.0（碱性）的环境中DNA的磷酸基团解离，使DNA在该环境中带上负电荷，在电场中向正极方向泳动 因为各种DNA分子的电荷数、构象、分子量不同，它们在通过凝胶立体网络是所受的动力和阻力不同，所以泳动的速度有差异，达到分离的目的 DNA显色剂多用EB，它能和碱基间的氢键结合，在波长为254nm~365nm的紫外光照射下呈橘红色（530nm）的荧光 DNA琼脂糖基本原理 /hbooks/genetics/biotech/gels/agardna.html 实验结果的分析 PCR基本原理及相关知识 The Polymerase Chain Reaction Sometimes called molecular photocopying, the polymerase chain reaction (PCR) is a fast and inexpensive technique used to amplify, or make many copies of, small segments of DNA. the technology empowers scientists to undergo a number of processes, from DNA fingerprinting to mapping the human genome. In 1983, Kary Mullis invented the PCR. The process is an invaluable tool to todays molecular biologists and biotechnology corporations. Kary B. Mullis As he wrote later in Scientific American: Beginning with a single molecule of the genetic material DNA, the PCR can generate 100 billion similar molecules in an afternoon. The reaction is easy to execute. It requires no more than a test tube, a few simple reagents and a source of heat. (1944 - ) The Nobel Prize in Chemistry 1993 for his invention of the polymerase chain reaction (PCR) method（1/2 of the prize ） 3 step and 30 cycles for PCR Step 1.