天然药物化学子教案第四章 色谱分离法.ppt

知识目标： 能力目标： 本 章 内 容 十、电泳技术 色谱技术 水平上样 十、电泳技术 色谱技术 垂直上样 十、电泳技术 色谱技术 十、电泳技术 色谱技术 HPCE-10HPCE-10 高效毛细管电泳仪 十、电泳技术 色谱技术 1．什么是电泳？ 带电荷的物质在电场中的趋向运动称为电泳。 【相关链接】 2．琼脂糖凝胶是一种什么化合物？ 琼脂糖的结构单元是D-半乳糖和3.6-脱水-L-半乳糖，是由琼脂分离制备的链状多糖，许多琼脂糖链通过氢键及其他力的作用而互相盘绕形成绳状琼脂糖束，构成大网孔型凝胶。 十、电泳技术 色谱技术 3．聚丙烯酰胺凝胶是一种什么化合物？ 【相关链接】 聚丙烯酰胺凝胶（Polyacrylamide gel，PAG）是由单体的丙烯酰胺在催化剂N，N，N，，N，-四甲基乙二胺和过硫酸胺的存在下发生聚合反应，再与交联剂N,N,－亚甲双丙烯酰胺作用，形成立体网状的多聚体，具有分子筛效应。 十、电泳技术 色谱技术 十一、干柱色谱法 干柱色谱法是指将干燥的填充剂直接装入色谱柱后进行色谱分离的方法。此法具有分离效果好、设备简单、溶剂消耗量少、可以直接套用薄层色谱的最佳分离条件等优点，但填充剂的消耗量较大，适用于制备性分离。 色谱技术 （1）装柱：干柱色谱法可选择玻璃柱和聚乙烯薄膜柱。将聚乙烯薄膜的一端封闭，另端充入空气，用橡皮筋扎紧后，置80～90℃水浴上烫平袋状薄膜的两条折边，解开橡皮筋，将一团棉花从开口端塞入底端，分次倒入所需的填充剂，每次倒入后，垂直于硬台面上轻轻蹾紧，再用手轻拍柱顶使填充剂顶端平整，用夹子将聚乙烯薄膜柱垂直夹好，封闭端用大头针打孔后即得。玻璃柱的装柱方法同上，不同的是底端加滤纸，无需打孔。 操作步骤 十一、干柱色谱法 色谱技术 （2）上样：有溶液上样和拌样上样两种方法。溶液上样方法是用适量洗脱剂溶解试样，置分液漏斗中，打开活塞使试样溶液迅速加于柱顶，用手轻拍柱顶，赶走气泡并使柱顶平整，等试样溶液完全进入填充剂中，加少量洗脱剂冲洗两次后即可。拌样上样方法是将试样溶于适量的低沸点易溶溶剂，加入5倍量填充剂拌匀，干燥后加于柱顶，等试样溶液完全进入填充剂中，加少量洗脱剂冲洗两次后即可。 操作步骤 十一、干柱色谱法 色谱技术 （3）洗脱：色谱柱顶端放一分液漏斗，使分液漏斗下端距离柱顶端5厘米，将洗脱剂装入分液漏斗中，打开活塞使洗脱剂流入柱内，洗脱自动进行。洗脱结束后，分离物质的层带可用刀片或刮刀分出，合并相同成分，浓缩后结晶。 操作步骤 十一、干柱色谱法 色谱技术 （1）柱的长度一般为50厘米，可根据试样的分离难易调整选择。 （2）试样量与填充剂量之比一般为1︰100～300。 （3）装柱前，活性较低的吸附剂不需要用洗脱剂饱和。 十一、干柱色谱法 操作提示 色谱技术 （4）对于溶于洗脱剂的试样选用溶液加样法，而不溶于洗脱剂的试样则选用拌样加样法。 （5）洗脱过程中，溶剂前沿保持整齐。 （6）玻璃柱装柱容易，但各层带位置不能用紫外光灯确定；聚乙烯薄膜柱可用紫外光灯确定各层带位置，但装柱较难。 十一、干柱色谱法 操作提示 色谱技术 十二、气相色谱法 气相色谱法（gas chromatography，GC）是一种以气体作为流动相，利用混合物中各组分在气体与固定相之间吸附能力的不同或分配系数的差异而获得分离的色谱分离方法。根据固定相的不同，可分为气－固吸附色谱及气-液分配色谱两类。其中，以气-液分配色谱的应用最为普遍。 色谱技术 气相色谱法具有分离效率高、分析速度快、试样用量少（气体试样可为1ml，液体试样为0.1μl，固体试样可为几微克）、选择性好、应用范围广等优点，目前已广泛应用于石油化工、食品卫生及药物分析等领域。但气相色谱法也存在一些不足之处，如不适宜分离高沸点、热稳定性差、高极性的化合物，柱的载样量较小，无法进行大规模制备性分离等，在一定程度上限制了该法的应用。 十二、气相色谱法 色谱技术 由于气相色谱中流动相为气体，要求试样必须能够在一定温度下气化，故在天然药物化学成分的研究方面，特别适用于具有沸点低、易挥发特性的挥发油成分的分离、鉴定和定量分析，现已成为天然药物及其制剂中挥发性成分研究的重要手段之一。 十二、气相色谱法 色谱技术 （1）先安装好相关设备，检查各系统各接头，确定无漏气后，开始操作。 操作步骤 （2）打开气流总阀门，调节减压阀使气压约为22kg/cm2，再调节稳压器针形阀，使载气流速控制在所需要的流速值。 （3）加热色谱柱至所需的柱温，并根据仪器恒温箱的性能控制此温度。通常采用与被分离物质的平均沸点相近或稍低的柱温。如果被分离物质的沸程太宽，升高柱温则可用程序升温法。